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专利号: 2020103605213
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种鉴别猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的PCR‑HRM引物,其特征在于:包括引物对P‑F和P‑R,引物对的核苷酸序列如下:P‑F:GATGGTGGTTGTAASACTAT;

P‑R:ACAGTRGCACCTATGTAGCC。

2.权利要求1中所述的鉴别猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的PCR‑HRM引物在制备鉴别猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的试剂盒中的应用。

3.一种鉴别猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的试剂盒,其特征在于:包括权利要求1中所述的PCR‑HRM引物,和PCR‑HRM扩增反应所需的试剂。

4.根据权利要求3中所述的鉴别猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的试剂盒,其特征在于:所述的PCR‑HRM扩增反应所需的试剂包括HRM Analysis Premix;所述的HRM Analysis Premix中包含饱和荧光染料。

5.根据权利要求4中所述的鉴别猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的试剂盒,其特征在于:所述的饱和荧光染料为EvaGreen荧光染料。

6.权利要求3~5任一项中所述的鉴别猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的试剂盒在鉴别猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒中的应用,其特征在于:所述的应用为非诊断目的研究中的用途。

7.一种鉴别猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的方法,其特征在于:从待测样品中提取病毒基因组,利用权利要求1中所述的PCR‑HRM引物进行荧光定量PCR扩增和HRM分析,根据HRM曲线鉴别出猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒;所述的方法为非诊断目的研究方法。

8.根据权利要求7中所述的鉴别猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的方法,其特征在于:所述的病毒基因组为病毒RNA时,先将得到的病毒RNA逆转录成cDNA,以得到的cDNA为模板,再利用权利要求1中所述的PCR‑HRM引物进行荧光定量PCR扩增和HRM分析。

9.根据权利要求7或8任一项中所述的鉴别猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的方法,其特征在于:所述的荧光定量PCR扩增的体系为:每20μL反应体系中,含:2×HRM Analysis Premix 10μL,浓度为10μmol/L的上游引物P‑F 0.5μL,浓度为10μmol/L的下游引物P‑R 0.5μL,模板1μL,无核酸酶双蒸水余量;所述的HRM Analysis Premix中包含饱和荧光染料。

10.根据权利要求9中所述的鉴别猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的方法,其特征在于:所述的荧光定量PCR扩增的条件为: 95℃预变性2min; 95℃变性10s、60℃退火30s、72℃延伸20s,循环35次; 72℃终延伸10min;

所述的HRM分析的条件为70℃到83℃以0.1℃/s的熔解速率运行。