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专利号: 2020104452249
申请人: 江西师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 一般的物理或化学的方法或装置
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、首先采用脱脂棉作为基质,经高碘酸钠溶液醛基化反应,制备得到醛基化脱脂棉;

S2、其次采用阿卡波糖作为亲和配基,偶联在步骤S1制备得到的醛基化脱脂棉上,制备得到偶联产物;

S3、再次采用硼氢化钠溶液还原步骤S2制备得到的偶联产物,制备得到稳定的亲和层析介质;

S4、最后将步骤S3制备得到的亲和层析介质用蒸馏水洗涤抽干,储存在乙醇溶液中备用。

2.根据权利要求1所述的一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于:所述脱脂棉与所述高碘酸钠的质量比为100:1-5。

3.根据权利要求1所述的一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于:所述醛基化脱脂棉与所述阿卡波糖的质量比为100:1-5。

4.根据权利要求1所述的一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于:所述偶联产物与所述硼氢化钠的质量比为100:1-5。

5.根据权利要求1-4中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于:所述步骤S1中,醛基化反应的温度为10-50℃,时间为

0.5-5h,转速为50-500rpm。

6.根据权利要求1-4中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于:所述步骤S2中,偶联反应的温度为10-40℃,时间为2-

30h,转速为50-500rpm。

7.根据权利要求1-4中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于:所述步骤S3中,还原反应的温度为2-6℃,时间为0.5-

5h。

8.根据权利要求1-4中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法,其特征在于:所述步骤S4中,所述亲和层析介质储存的温度为2-6℃,所述乙醇溶液的浓度为70-75%。

9.一种分离纯化α-葡萄糖苷酶的方法,其特征在于,利用权利要求1-8中任意一项权利要求制备得到的亲和层析介质分离纯化所述α-葡萄糖苷酶,包括以下步骤:(1)将亲和层析介质装入层析柱中,用蒸馏水平衡;

(2)将新鲜动物小肠排空内容物,用2-6℃的冰冷蒸馏水冲洗干净,冰浴下切开小肠,用薄竹片刮取小肠黏膜,加入1-3倍体积、温度为2-6℃的冰冷蒸馏水,匀浆,在温度为4℃、转速为8000rpm条件下,低温离心20 min,取上清液,得到α-葡萄糖苷酶粗酶液;

(3)将步骤(2)中得到的α-葡萄糖苷酶粗酶液加入层析柱中孵育10min后,使用浓度为

1%的氯化钠溶液洗脱杂蛋白,设定流速为1-1.5倍柱体积/h,洗脱2h,再使用浓度为1%麦芽糖溶液洗脱α-葡萄糖苷酶,流速为1-1.5倍柱体积/h,洗脱1h;

(4)将步骤(3)中得到的α-葡萄糖苷酶洗脱液装入截留分子量1500的透析袋,放入2-6℃的100倍体积的冰冷蒸馏水透析,每隔8小时换一次冰冷蒸馏水,共换3次;

(5)将步骤(4)中得到的α-葡萄糖苷酶溶液冷冻干燥,得到α-葡萄糖苷酶冻干粉,称重后装瓶密封,-20℃冷冻保存。