1.一种羰基还原酶突变体,其特征在于所述羰基还原酶突变体氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示。
2.一种权利要求1所述羰基还原酶突变体在不对称还原脂肪族酮中的应用,其特征在于所述脂肪族酮酯为6‑氰基‑(5R)‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯或4‑氯乙酰乙酸乙酯。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述的应用方法为:将含羰基还原酶突变体基因的工程菌经发酵培养后的发酵液离心,收集湿菌体,以湿菌体或湿菌体经超声破碎且镍柱纯化的纯酶为催化剂,以含葡萄糖脱氢酶基因的工程菌经诱导培养获得的湿菌体或湿菌体经超声破碎且镍柱纯化的纯酶为辅助催化剂,以脂肪族酮酯为底物,以葡萄糖为辅底物,以pH 7.0、100 mM的PBS缓冲液为反应介质构成转化体系,在35‑40℃、400‑600 rpm条件下进行反应,反应结束,反应液分离纯化,获得手性化合物;当底物为6‑氰基‑(5R)‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯时,手性化合物为6‑氰基‑(3R, 5R)‑二羟基己酸叔丁酯;当底物为4‑氯乙酰乙酸乙酯时,手性化合物为(S)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸乙酯。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述反应体系中,底物添加终浓度为10‑20 g/L,葡萄糖添加终浓度20‑40 g/L,所述催化剂与辅助催化剂的湿菌体以干重比1.0‑5.0 : 1混合成混合菌体形式加入,催化剂和辅助催化剂用量以混合菌体总量干重计为5‑12.5 g DCW/L。
5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述湿菌体按如下方法制备:将含羰基还原酶突变体基因的工程菌接种到含终浓度50 μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃培养10 h,以体积浓度1.5‑2.0%的接种量接种到新鲜的含终浓度50 μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃、200 rpm培养2 h,再向培养液中加入终浓度为0.10 mM异丙基硫代半乳糖苷,28℃培养12 h后,4℃、8000 rpm离心10 min,获得含羰基还原酶突变体的湿菌体。
6.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述葡萄糖脱氢酶基因的核苷酸序列如GenBank NO. KM817194.1所示。