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专利号: 2020105238454
申请人: 山东师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于发夹锁定脱氧核酶探针的金纳米颗粒传感器,其特征是,包括MUC1适配体探针、发夹锁定脱氧核酶探针和金纳米颗粒;

所述MUC1适配体探针包括依次连接的适配体DNA序列和发夹DNA序列,所述适配体DNA序列和发夹DNA序列形成发夹结构,MUC1适配体探针能够识别MUC1并释放适配体DNA序列;

所述发夹锁定脱氧核酶探针为单链DNA序列,发夹锁定脱氧核酶探针由5'端至3'依次包括第一连接序列、第一结合序列、底物序列、第二连接序列、脱氧核酶序列和第二结合序列,第一连接序列与第二连接序列互补后能够使发夹锁定脱氧核酶探针形成发夹结构,所述底物序列包含切割位点,所述第一结合序列、第二结合序列能够与适配体DNA序列互补,第一结合序列、第二结合序列与适配体DNA序列互补后,能够使脱氧核酶序列在催化核心中形成活性二级结构,所述发夹锁定脱氧核酶探针的5'端连接能够被金纳米颗粒淬灭的荧光基团;发夹锁定脱氧核酶探针的3'端连接金纳米颗粒。

2.如权利要求1所述的基于发夹锁定脱氧核酶探针的金纳米颗粒传感器,其特征是,发夹锁定脱氧核酶探针的3'端通过S-Au键连接金纳米颗粒。

3.如权利要求1所述的基于发夹锁定脱氧核酶探针的金纳米颗粒传感器,其特征是,第二连接序列为多聚T。

4.如权利要求1所述的基于发夹锁定脱氧核酶探针的金纳米颗粒传感器,其特征是,所述荧光基团为FAM。

5.如权利要求1所述的基于发夹锁定脱氧核酶探针的金纳米颗粒传感器,其特征是,所述MUC1适配体探针的序列为:GGT CCC ATA GGT TTC CTA GTT GAC GAC CTA TGG GAC CGGTGT GCT;

发夹锁定脱氧核酶探针的序列为:CAAAAAAGC ACA CCG GCT rAGT CTT TTT TTT TGA TCCGAG CCG GAC GAA GCC CCA TAG GT。

6.一种权利要求1~5任一所述的基于发夹锁定脱氧核酶探针的金纳米颗粒传感器在检测MUC1中的应用。

7.一种检测MUC1的方法,其特征是,提供权利要求1~5任一所述的基于发夹锁定脱氧核酶探针的金纳米颗粒传感器,待测样品中的MUC1与MUC1适配体探针结合,释放含有适配体DNA序列的探针复合物,探针复合物打开发夹锁定脱氧核酶探针的发夹结构,并在催化核心中形成活性二级结构,在镁离子作为辅酶的作用下,对底物序列进行自切割,使荧光基团脱离金纳米颗粒,对脱离的荧光基团进行荧光检测。

8.如权利要求7所述的检测MUC1的方法,其特征是,形成发夹结构的过程为:将探针与含有Tris-HCl和MgCl2的杂交缓冲液混合均匀,于90~100℃水浴锅中进行变性反应,然后冷却至室温。

9.如权利要求7所述的检测MUC1的方法,其特征是,步骤为:将MUC1适配体探针加入至待测样品中,在36~38℃下孵育,然后加入连接MUC1适配体探针的金纳米颗粒和镁盐,在36~38℃下继续孵育,然后进行荧光检测。

10.一种检测试剂盒,其特征是,包括权利要求1~5任一所述的基于发夹锁定脱氧核酶探针的金纳米颗粒传感器、镁盐、缓冲溶液。