1.一种利用防风叶片获得再生植株的方法,其特征在于,包括:
1)将防风外植体培养得到愈伤组织,
2)将愈伤组织进行诱导培养得到体细胞胚胎,
3)将所述体细胞胚胎进一步培养得到防风再生植株。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤1)中,以防风叶片作为外植体,将防风外植体培养到愈伤组织的过程具体包括:
14)外植体的暗培养,将叶片于25~28℃在暗培养培养基中全暗培养15~21天,所述暗培养培养基为MS、2,4-二氯苯氧乙酸、6-苄氨基腺嘌呤、葡萄糖和植物凝胶的混合物,所述暗培养培养基中每升MS培养基中含有1.0~1.5mg2,4-二氯苯氧乙酸和0.5~1.0mg6-苄氨基腺嘌呤;所述葡萄糖的质量分数为1.5~3%,所述植物凝胶的质量分数为0.35~0.4%,所述暗培养培养基的pH值为6.5~7.5;
15)将暗培养后的细胞组织在暗培养培养基中25~28℃、16h光照/8h黑暗条件下培养
30~35天;
16)将步骤12)中得到的细胞组织在愈伤培养基中28~30℃、16h光照/8h黑暗条件下培养,每25~30天转接一次,3-4次转接得到愈伤组织,所述愈伤培养基为MS、2,4-二氯苯氧乙酸、6-苄氨基腺嘌呤、葡萄糖和植物凝胶的混合物,所述暗培养培养基中每升MS培养基中含有0.2-0.5mg2,4-二氯苯氧乙酸和0.4-0.6mg6-苄氨基腺嘌呤;所述葡萄糖的质量分数为
1.5~3%,所述植物凝胶的质量分数为0.35~0.4%,所述愈伤培养基的pH值为6.5~7.5。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤1)中所述步骤12)中的光照强度为1000~3000Lx,所述步骤13)中的光照强度为3000~5000Lx。
4.根据权利要求1-3任一所述的,其特征在于,所述将愈伤组织进行诱导、培养得到体细胞胚胎包括:将愈伤组织在分化培养基中于25~28℃、16h光照/8h黑暗条件下培养,转接
0-1次,所述分化培养基为N6、2.4-D、NAA、ABA、葡萄糖和植物凝胶的混合物;每升N6培养基中含有2.4-D 0.05~0.2mg、NAA0.1~0.5mg、ABA0.1~0.5mg,所述葡萄糖的质量分数为1.5~3%,所述植物凝胶的质量分数为0.35~0.4%,所述愈伤培养基的pH值为6.5~7.5。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述步骤1)中所述步骤2)中的光照强度为
1000~3000Lx。
6.根据权利要求1-5任一所述的方法,其特征在于,所述步骤1)中所述步骤3)包括将体细胞胚胎在成苗培养基中温度25~28℃,16h光照/8h黑暗条件下培养40~50天,所述成苗培养基为:MS+KT0.5~1.0mg/L+IAA0.05~0.1mg/L+葡萄糖1.5~3%+植物凝胶0.35~
0.4%。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述步骤1)中所述步骤3中的光照强度为
1000~3000Lx。
8.根据权利要求1-7任一所述的方法,其特征在于,还包括,防风再生植株的炼苗和移栽,具体包括:当防风幼苗的苗高大于5厘米时,对防风幼苗使用进行封闭培养基培养,培养至少7天后,进行移栽。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述封闭培养基为苯甲酸钠水溶液,所述苯甲酸钠水溶液的浓度为50mg/L。
10.根据权利要求1-9任一所述的方法,其特征在于,所述将防风外植体进行暗培养得到愈伤组织之前,进行外植体的消毒和预处理。