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专利号: 2020105871625
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于荧光淬灭拉曼增强的前列腺特异性抗原双信号光谱分析方法,其特征在于,所述的分析方法具体包括以下步骤:将ZGGO:Cr,Er,Yb/PSA‑A溶液,与Au NBPs@4‑ATP/PSA‑C溶液搅拌混匀,固液分离取沉淀物,并将其重新分散在PBS缓冲液中,加入PSA溶液并用紫外灯照射,最后分别测定溶液荧光光谱以及拉曼光谱;

所述分析方法的具体步骤如下:

(1)ZGGO:Cr,Er,Yb/PSA‑A溶液的制备方法:①长余辉纳米粒子ZGGO:Cr,Er,Yb NPs的制备:将Cr(NO3)2、Zn(NO3)2、Yb(NO3)2、Er(NO3)2、锗酸铵溶液与Ga(NO3)2溶液混合均匀得到溶液1,随后加入CTAB,并调节溶液的pH值至7‑9,超声处理,搅拌混匀后进行水热反应,待反应结束后固液分离取沉淀物,洗涤并干燥即得长余辉纳米粒子ZGGO:Cr,Er,Yb NPs;

②长余辉纳米粒子ZGGO:Cr,Er,Yb NPs的氨基化:将上述所得ZGGO:Cr,Er,Yb NPs分散于NaOH溶液中,剧烈搅拌后固液分离取沉淀,并将其分散在N,N‑二甲基甲酰胺试剂中,然后逐滴加入3‑氨丙基三乙氧基硅烷APTES试剂,在75‑85℃水浴中加热,待反应结束后固液分离取固相,并将固相分散在水中,得到氨基化ZGGO:Cr,Er,Yb NPs溶液;

③长余辉纳米粒子表面前列腺特异性抗原适配体PSA‑A修饰:向PSA‑A溶液中加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺与N‑羟基丁二酰亚胺的混合溶液EDC/NHS孵育30‑

40min,孵育完成后加入步骤②中所得氨基化的ZGGO:Cr,Er,Yb NPs溶液,并在室温下振荡孵育5‑6h,反应结束后固液分离取沉淀物,用水清洗最后将沉淀物重新均匀分散在PBS缓冲溶液中,即得ZGGO:Cr,Er,Yb/PSA‑A溶液;

(2)Au NBPs@4‑ATP/PSA‑C溶液的制备方法:①金锥纳米Au NBPs溶液的制备:将HAuCl4、十六烷基三甲基氯化铵CTAC、柠檬酸溶液与NaBH4溶液混合搅拌;将所得溶液在75‑85℃油浴中加热85‑95min得到金种溶液,将上述金种溶液加热CTAB、HAuCl4、AgNO3、HCl与AA抗坏血酸的混合溶液中,并孵育1.8‑2.2h得到金锥纳米Au NBPs溶液;

②Au NBPs@4‑ATP的制备:向金锥纳米Au NBPs溶液中加入4‑ATP溶液,反应结束后固液分离取固相并用水洗涤,将固相溶解在水中得到Au NBPs@4‑ATP溶液;

③表面前列腺特异性抗原适配体互补链PSA‑C修饰:向前列腺特异性抗原适配体互补链PSA‑C溶液中加入步骤②中所得Au NBPs@4‑ATP溶液,室温下搅拌8‑10h;反应结束后固液分离收集沉淀物,用水清洗最后分散在Tris‑HCl缓冲溶液中,即得Au NBPs@4‑ATP/PSA‑C溶液;

(3)荧光拉曼双重光谱分析方法的构建:

将ZGGO:Cr,Er,Yb/PSA‑A溶液与Au NBPs/PSA‑C溶液在PBS缓冲液中搅拌混匀,并在室温下孵育4‑6h,固液分离收集沉淀物,将其重新分散在PBS缓冲液中;将PSA标准溶液分别加入到上述溶液中,室温下振荡孵育5‑6h;之后使用250‑260nm紫外灯照射,测试所得溶液的荧光光谱,得到以PSA浓度对数为横坐标,以检测探针ZGGO:Cr,Er,Yb/PSA‑A的发光恢复程度F‑F0为纵坐标的标准曲线;测试所得溶液的拉曼光谱,得到以PSA浓度对数为横坐标,以检测探针Au NBPs@4‑ATP/PSA‑C的拉曼信号变化程度I‑I0为纵坐标的标准曲线,其中,所述F代表有PSA时的荧光强度;I代表有PSA时的拉曼强度;F0代表没有PSA时的荧光强度;I0代表没有PSA时的拉曼强度。

2.根据权利要求1中所述的基于荧光淬灭拉曼增强的前列腺特异性抗原双信号光谱分析方法,其特征在于,步骤(1)①中所述Cr(NO3)2、Zn(NO3)2、Yb(NO3)2、Er(NO3)2、锗酸铵与Ga(NO3)2的摩尔比为0.04‑0.06:12‑14:0.2‑0.3:0.02‑0.03:2‑3:14‑16;CTAB的使用量为15‑

17mg。

3.根据权利要求1中所述的基于荧光淬灭拉曼增强的前列腺特异性抗原双信号光谱分析方法,其特征在于,步骤(1)①中所述水热反应条件为在110‑130℃条件下加热14‑16h。

4.根据权利要求1中所述的基于荧光淬灭拉曼增强的前列腺特异性抗原双信号光谱分析方法,其特征在于,步骤(1)②所述ZGGO:Cr,Er,Yb NPs和固体NaOH的质量比为8‑12:

0.48‑1.2,N,N‑二甲基甲酰胺溶剂与APTES溶液体积比为30‑50:0.2‑0.8。

5.根据权利要求1中所述的基于荧光淬灭拉曼增强的前列腺特异性抗原双信号光谱分析方法,其特征在于,步骤(1)③前列腺特异性抗原适配体PSA‑A稀释后的浓度为5‑15μM,EDC/NHS浓度为55‑65mM,所述稀释后PSA‑A溶液、EDC/NHS和氨基化的ZGGO:Cr,Er,Yb NPs溶液体积比为22‑24:5‑7:4‑6。

6.根据权利要求1中所述的基于荧光淬灭拉曼增强的前列腺特异性抗原双信号光谱分析方法,其特征在于,步骤(2)①制备金种溶液时所用的HAuCl4、CTAC、柠檬酸溶液与NaBH4的摩尔比为2.2‑2.5:495‑505:45‑55:6.1‑6.5;制备Au NBPs时CTAB、HAuCl4、AgNO3、HCl与AA的摩尔比为8‑12:0.04‑0.06:0.0008‑0.0012:1‑3:0.07‑0.09。

7.根据权利要求1中所述的基于荧光淬灭拉曼增强的前列腺特异性抗原双信号光谱分析方法,其特征在于,步骤(2)②中Au NBPs与4‑ATP的摩尔比为1:50‑1:60。

8.根据权利要求1中所述的基于荧光淬灭拉曼增强的前列腺特异性抗原双信号光谱分析方法,步骤(2)③中所述PSA‑C与Au NBPs@4‑ATP的摩尔比为1:90‑1:110。

9.根据权利要求1中所述的基于荧光淬灭拉曼增强的前列腺特异性抗原双信号光谱分析方法,其特征在于,步骤(1)、(2)、(3)中所述PBS缓冲溶液浓度为8‑12mM,pH为7.2‑7.6;

Tris‑HCl缓冲液pH为7.0‑7.4。