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专利号: 202010644394X
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种双辅酶依赖型草铵膦脱氢酶突变体,其特征在于,所述突变体由SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第91位、第111位、第240位和第261位进行多点突变后获得;

其中,第91位的甘氨酸突变为丙氨酸,第111位的谷氨酰胺突变为丝氨酸,第240位的天冬酰胺突变为赖氨酸,第261位的天冬氨酸突变为谷氨酰胺。

2.如权利要求1所述的双辅酶依赖型草铵膦脱氢酶突变体的编码基因。

3.如权利要求2所述的编码基因,其特征在于,所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

4.如权利要求1所述的双辅酶依赖型草铵膦脱氢酶突变体在催化合成L‑草铵膦中的应用。

5.一种基因工程菌,包括宿主细胞和转入宿主细胞的目的基因,其特征在于,所述目的基因包含如权利要求2或3任一项所述的双辅酶依赖型草铵膦脱氢酶突变体的编码基因。

6.如权利要求5所述的基因工程菌,其特征在于,所述目的基因还包含葡萄糖脱氢酶的编码基因。

7.如权利要求5或6任一项所述的基因工程菌在催化合成L‑草铵膦中的应用。

8.一种催化合成L‑草铵膦的方法,其特征在于,为以下两种中的任意一种:(1)以2‑羰基‑4‑(羟基甲基氧膦基)‑丁酸或其盐为底物,在无机氨基供体和辅酶循环系统存在的条件下,利用催化剂催化底物发生还原胺化反应,制得L‑草铵膦;

(2)以D‑草铵膦为底物,在无机氨基供体、D‑氨基酸氧化酶和和辅酶循环系统存在的条件下,利用催化剂催化底物反应获得L‑草铵膦;

在(1)和(2)中,所述辅酶循环系统为葡萄糖脱氢酶循环系统;所述催化剂为如权利要求1所述的双辅酶依赖型草铵膦脱氢酶突变体或其固定化酶,或如权利要求5或6任一项所述的基因工程菌。

9.如权利要求8所述的催化合成L‑草铵膦的方法,其特征在于,所述无机氨基供体为硫酸铵。