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专利号: 2020106719042
申请人: 江西科技师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种非标记型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器,包括工作电极,参比电极和对电极,其特征在于,其中,所述工作电极用石墨烯气凝胶‑二硫化钼/金纳米粒子的复合材料作为修饰材料,前列腺特异性抗体作为分子识别原件;所述工作电极为玻碳电极表面依次修饰石墨烯气凝胶‑二硫化钼/金纳米粒子的复合材料、前列腺特异性抗体、牛血清蛋白;所述参比电极为饱和甘汞电极,所述对电极为铂片电极;

所述的一种非标记型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的制备方法,包括以下步骤:(1)制备石墨烯气凝胶‑二硫化钼复合材料/金纳米粒子复合材料,即GAs‑MoS2/AuNPs复合材料;

(2)制备非标记型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作电极;

(3)制备非标记型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作曲线;

步骤(1)具体包括以下步骤:

①制备层状的MoS2

在容器中加入0.6g剥离前的MoS2粉末,4mL正丁基锂以及10mL超干正己烷,并在氮气保护及搅拌条件下,80℃反应48h,待自然冷却后,离心洗涤产物,去上清液,用正己烷洗涤3‑4次,除去正丁基锂,得到的粉末产物加水超声1h,10000r/min离心30min后取上层的悬浮液,即为层状MoS2的水分散液;

②制备石墨烯气凝胶‑二硫化钼复合材料

‑1 ‑1

首先,取4mL、1mg mL 上述所得的MoS2分散液,加入16mL、2mg mL 氧化石墨烯的水分散液,搅拌1h至其分散均匀,将混合液移入反应釜中,在180℃下,水热反应12h,最后,冻干产物,得到石墨烯气凝胶‑二硫化钼复合材料,即GAs‑MoS2;

③制备石墨烯气凝胶‑二硫化钼/金纳米粒子复合材料

将直径为3.0mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉抛光成镜面,分别依次在超纯水、无水乙醇、超纯水中超声清洗;将10μL、1mg/mL所得的GAs‑MoS2复合材料分散液滴加到电极表面上,在空气中自然干燥,作为工作电极;使用电化学工作站以三电极体系沉积金纳米粒子,以饱和‑1甘汞电极为参比电极,铂片电极为对电极,在5.0mL、5mmol L 的氯金酸溶液中,用时间‑电流方法进行沉积,输入电压为‑0.2V,运行时间为120s,得到石墨烯气凝胶‑二硫化钼/金纳米粒子的复合材料,即GAs‑MoS2/AuNPs复合材料;

步骤(2)具体包括以下步骤:

将6.0μL、21.994μg/mL的前列腺特异性抗体滴加到步骤(1)制得的GAs‑MoS2/AuNPs复合材料修饰的工作电极表面,在37℃水浴槽中孵育1.5小时;然后将6.0μL、0.1wt%的牛血清白蛋白溶液滴加到电极表面,在37℃水浴槽中固定0.5小时,用以封闭非特异性活性位点,用pH为7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面,自然晾干,得到非标记型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作电极;

步骤(3)具体包括以下步骤:

将一系列不同浓度的前列腺特异性抗原溶液滴加在步骤(2)制备的工作电极表面,在

37℃水浴槽中孵育1小时,用pH为7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面,自然晾干,使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂片电极为对电极,在含有0.1M 

3‑/4‑

KCl和5mM[Fe(CN)6] 且pH为7.0的磷酸缓冲液中,用差分脉冲阳极伏安法测固定抗原前后的工作电极的响应电流,得到二者电流差ΔI与初始电流I的关系,即抑制率,为ΔI/I,记录不同浓度下的抑制率与抗原浓度CPSA,得到工作曲线,利用工作曲线法,得到待测样品中前列腺特异性抗原的浓度。