1.一种检测尿酸及尿酸氧化酶的电化学方法,其特征在于,具体步骤如下:
(1)GSH‑Ag(I)复合物的制备
依次取1~10μL浓度为0.1~20mM的硝酸银水溶液、1~10μL浓度为0.1~20mM谷胱甘肽水溶液,混合均匀后加入磷酸缓冲溶液配成50~120μL的溶液,将溶液在25~40℃下缓缓震荡8~17min,即得到GSH‑Ag(I)复合物,使用前将该复合物溶液与50~120μL0.02%wt Nafion溶液混合均匀,静置5~20min;
(2)电化学生物传感器的制备
a.将玻碳电极GCE在麂皮上依次用粒径0.3μm、0.05μm的三氧化二铝粉末抛光0.5~
5min,抛光后将电极置于超声清洗器中用超纯水超声清洗1~5min,然后用N2吹干,记为GCE;
b.利用循环伏安法,设置电位范围为‑1.2~0.5V、扫速5~20mV/s, 将0.5~2mg/mL石墨烯GO分散液电沉积到裸玻碳电极上得到GO/GCE;然后用取5~15μL步骤(1)中溶液滴涂于GO/GCE上,室温下静置20~60min,用超纯水缓缓冲洗电极,记为GSH‑Ag(I)/GO/GCE;
(3)尿酸及尿酸氧化酶的分析检测
总体积为2mL的反应液,包括0~5mM的尿酸UA,0~2000U/L的尿酸氧化酶UOx,磷酸缓冲溶液,于25~45℃下反应2~10min,随后用于GSH‑Ag(I)/GO/GCE的电化学响应检测。
2.根据权利要求1所述的电化学方法,其特征在于,在0.001~1mM范围内改变尿酸UA浓度,利用电流‑时间法,设置电位为+0.4V,利用所制备电化学传感器对H2O2的电化学响应,在含有UOx反应液的电解质溶液中获得一系列不同浓度尿酸UA对应的电流大小,建立电流响应与尿酸UA之间的定量关系,根据两者之间的定量关系,确定待测样品中尿酸UA的含量。
3.根据权利要求2所述的电化学方法,其特征在于,电流响应对尿酸UA浓度线性相关方程为y=53.47CUA+0.01,r=0.9939,线性范围为0.001~1mM,检测限为0.3μM。
4.根据权利要求1所述的电化学方法,其特征在于,在1~2000U/L范围内改变尿酸氧化酶UOx浓度,利用电流‑时间法,设置电位为+0.4V,利用所制备电化学传感器对H2O2的电化学响应,在含有尿酸UA反应液的电解质溶液中获得一系列不同浓度尿酸氧化酶UOx对应的电流大小,建立电流响应与尿酸氧化酶UOx之间的定量关系,根据两者之间的定量关系,确定待测样品中尿酸氧化酶UOx的含量。
5.根据权利要求4所述的电化学方法,其特征在于,电流响应对尿酸氧化酶UOx浓度线性相关方程为y=18.07lgCUOx+0.05,r=0.9980,线性范围为1~2000U/L,检测限为0.5U/L。