1.一种二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药半抗原,其分子式为:
2.制备权利要求1中所述的二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药半抗原的方法,包括如下步骤:
1)使得5-羟基-2-硝基苯甲酸甲酯与氯硫代磷酸二乙酯发生反应,得到中间体5-((二乙氧基磷硫基)氧基)-2-硝基苯甲酸甲酯;
2)使得中间体5-((二乙氧基磷硫基)氧基)-2-硝基苯甲酸甲酯在酸性条件下水解,得到5-((二乙氧基磷硫酰硫基)氧基)-2-硝基苯甲酸,即二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药半抗原。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:
步骤1)中,所述反应在无水碳酸钾存在下进行;
5-羟基-2-硝基苯甲酸甲酯与无水碳酸钾的摩尔比为:1:2-3;
5-羟基-2-硝基苯甲酸甲酯与氯硫代磷酸二乙酯的摩尔比为:1:1-1.5;
所述反应在加热回流条件下进行,所述反应的温度为80℃,时间为2~3小时;
所述反应在有机溶剂中进行,所述有机溶剂具体可为乙腈;
所述反应完成后,待反应体系冷却至室温,加入水淬灭反应,接着加入二氯甲烷萃取分层,收集有机层干燥浓缩后柱色谱分离得到中间体5-((二乙氧基磷硫基)氧基)-2-硝基苯甲酸甲酯。
4.根据权利要求2或3所述的方法,其特征在于:步骤2)中,所述水解在有机溶剂中进行,所述有机溶剂具体可为四氢呋喃;
所述水解在室温下进行,所述水解的时间为4-12小时;
所述水解的操作为:将1份摩尔份数中间体5-((二乙氧基磷硫基)氧基)-2-硝基苯甲酸甲酯溶于3-4份四氢呋喃,加入等体积的6mol/L盐酸,反应体系室温搅拌12小时,加入20份水淬灭反应,接着加入20份乙酸乙酯萃取分层,收集有机层干燥浓缩后柱色谱分离得到化合物:5-((二乙氧基磷硫酰硫基)氧基)-2-硝基苯甲酸,即二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药半抗原。
5.一种二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药完全抗原,其结构式如下所示:Pr表示载体蛋白;
所述二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药完全抗原由所述二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药半抗原与载体蛋白偶联后得到。
6.制备权利要求5中二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药完全抗原的方法,包括如下步骤:
1)将二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药半抗原溶于二甲基甲酰胺中,加入二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺,室温搅拌得到A液;
2)将载体蛋白溶于碳酸盐缓冲液中,得到B液;
3)将上述A液滴加到B液中,搅拌,得到C液;
4)将C液置于透析袋,并于磷酸缓冲液中透析,收集透析袋中的溶液,即为二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药完全抗原;
具体地,步骤1)中,二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药半抗原、二甲基甲酰胺、二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的用量比依次可为:20μmol∶1-2mL∶60-120μmol∶60-120μmol;所述室温搅拌的时间为:18-24小时;
步骤2)中,所述载体蛋白为牛血清蛋白BSA,制备完全免疫抗原;
所述载体蛋白为卵血清白蛋白OVA,制备完全包被抗原;
载体蛋白和碳酸盐缓冲液的用量比为:0.4μmol∶3-6mL;
二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药半抗原与载体蛋白的摩尔比为:20:1-40:1,具体可为20:1;
步骤3)中,所述搅拌在4-25℃温度下搅拌10-12小时;
步骤4)中,所述透析过程中,每3小时换液一次,进行多次透析,具体可进行6次透析。
7.权利要求1所述的二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药半抗原或权利要求5所述的二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药完全抗原在制备二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药的广谱性抗体中的应用。
8.由权利要求5所述的二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药完全抗原制备的广谱性抗体。
9.权利要求8所述的广谱性抗体的以下任一应用:
1)在检测二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药中的应用;
2)在制备二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药的ELISA检测用试剂盒中的应用;
3)在制备二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药的胶体金检测试纸条中的应用。
10.由权利要求8所述的广谱性抗体制备的二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药检测试剂或试剂盒。