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专利号: 2020107490825
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种人源细胞凋亡调控蛋白Bcl‑2在提高酿酒酵母橙花叔醇产量中的应用,其特征在于所述应用的方法为:将过表达人源细胞凋亡调控蛋白Bcl‑2且含橙花叔醇合成酶基因的酿酒酵母工程菌接种至葡萄糖合成最小培养基,在30℃,摇瓶转速200rpm下培养过夜,取培养物以体积浓度1%的接种量接种至蔗糖合成最小培养基,在30℃,摇瓶转速200rpm条件下发酵培养24小时加入发酵液10%体积的十二烷,继续培养至橙花叔醇浓度不再继续增加,培养物离心,获得含橙花叔醇的十二烷有机相,提取橙花叔醇,从而提高酿酒酵母合成橙花叔醇的产量;

所述蔗糖合成最小培养基质量终浓度组成:2%蔗糖,0.17%酵母氮源,0.5%硫酸铵,

20mg/L微量营养素,溶剂为蒸馏水,pH 5.0;其中微量营养素是指组氨酸、亮氨酸或尿嘧啶中的一种或多种;所述葡萄糖合成最小培养基是将蔗糖合成最小培养基中2%蔗糖替换为

2%葡萄糖;在发酵培养过程中向蔗糖最小合成培养基中添加终浓度1~5mmol/L不饱和脂肪酸;

所述过表达人源细胞凋亡调控蛋白Bcl‑2的方法包括:将人源细胞凋亡调控蛋白Bcl‑2的编码基因与TDH3启动子整合到含橙花叔醇合成酶基因的酿酒酵母工程菌基因组位点YPRCtau3;或者使用pRS316质粒组成型过表达人源细胞凋亡调控蛋白Bcl‑2的编码基因,并将质粒导入含橙花叔醇合成酶基因的酿酒酵母工程菌;或者使用pRS316质粒过表达GAL1启动子驱动的人源细胞凋亡调控蛋白Bcl‑2的编码基因,并将质粒导入含橙花叔醇合成酶基因的酿酒酵母工程菌。

2.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述人源细胞凋亡调控蛋白Bcl‑2氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述人源细胞凋亡调控蛋白Bcl‑2的编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述橙花叔醇合成酶基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.4所示。

5.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述不饱和脂肪酸为油酸、亚油酸或亚麻酸中的一种。