1.一种检测透明质酸酶HAase的非诊断目的的方法,其特征在于:该方法采用的纳米复合材料是基于HAase-HA生物识别作用及自催化循环放大策略,所述的纳米复合材料采用细胞毒性低、生物相容性好的空心金纳米材料载带信号分子,利用透明质酸HA作为生物识别分子构建分子锁;
所述的分子锁是通过HA与带有氨基和巯基的聚乙二醇反应制得复合物HA-PEG-SH,然后再与空心金纳米材料反应构建而成;
所述的信号分子是罗丹明B;
所述的纳米复合材料的制备方法,包括如下步骤:
(1) 用pH=7.4的PBS缓冲溶液清洗20 μL巯基磁珠后,加入空心金纳米载体溶液200 μL,37(2)磁分离、清洗后加入终浓度为1.0×10
(3)磁分离、清洗后制得纳米载体复合物,保存备用;
(4)在0.5 mL 100 mg/mL HA水溶液中加入200 μL13 mg/mL羰基二咪唑的DMF溶液,室温反应2.0 h后,加入100 μL含有25 mg NH(5)经透析膜纯化,冷冻干燥,制得复合物HA-PEG-SH;
(6)将0.5 mL 2.4 mg/mL HA-PEG-SH的水溶液加入到步骤 (3) 制得的纳米载体复合物中,常温搅拌2.0 h;
(7)磁分离、清洗,最终制得用于检测HAase的纳米复合材料;
该方法包括以下步骤:
(1)取样本20 μL,加入到所述的纳米复合材料中,37(2)磁分离,取上清液用PBS缓冲溶液稀释至200 μL,并用0.1 mol/L的盐酸溶液调pH为5.0进行荧光检测。