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专利号: 2020107817911
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一株齐帕特罗单克隆抗体杂交瘤细胞株SMB1C2,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC,地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,分类命名为单克隆细胞株,保藏日期2019年11月28日,保藏编号CGMCC No.19170。

2.齐帕特罗单克隆抗体,其特征在于:它由权利要求1所述保藏编号为CGMCC No. 

19170的杂交瘤细胞株SMB1C2分泌产生。

3.齐帕特罗半抗原的制备方法,其特征在于:将4,5,6,7-四氢-6-羟亚胺基-咪唑并[4,

5,1-jk]-[1]苯并氮杂卓-2,7-(1H,6H)-二酮制备得到盐酸齐帕特罗,再与溴丁酸乙酯反应即得到齐帕特罗半抗原。

4.根据权利要求3所述齐帕特罗半抗原的制备方法,其特征在于步骤如下:

a、将100g的4,5,6,7-四氢-6-羟亚胺基-咪唑并[4,5,1-jk]-[1]苯并氮杂卓-2,7-(1H,

6H)-二酮溶于甲醇和DMF的混合溶剂中,搅拌均匀后和40g第一催化剂一起加入到反应器中,依次用氮气、氢气置换反应器中的空气后,向反应器中充入氢气,搅拌升温至30-50℃,氢气压力为1-10MPa,反应时间为4-24h,反应结束后,过滤回收催化剂;

b、将步骤a所得滤液加酸调节pH为6.5-8.0后加入丙酮,将混合物和15g第二催化剂一起加到反应器中,依次用氮气、氢气置换反应器中的空气后,向反应器中充入氢气,搅拌升温至55-90℃,氢气压力为1-10MPa,反应时间为1-48h,反应结束后,过滤回收催化剂;

c、将步骤b所得滤液加酸调节pH为4.0-8.0,浓缩去除溶剂,然后加入乙醇/水溶液,用碱调节pH为9.0-10.5,搅拌结晶即得齐帕特罗;

d、将步骤c所得齐帕特罗溶于甲醇中,再进一步与溴丁酸乙酯反应即得到齐帕特罗半抗原re-ZIL。

5.根据权利要求4所述齐帕特罗半抗原的制备方法,其特征在于:所述第一催化剂为氢化还原反应的催化剂,具体为负载量为5%的Pd/C、负载量为10%的Pd/C及负载量为1% - 5%的Pt/C中的一种或几种;

所述第二催化剂为氢化还原反应的催化剂;具体为负载量为5%的Pd/C、负载量为10%的Pd/C及负载量为1% - 5%的Pt/C和兰尼镍中的一种或几种。

6.齐帕特罗完全抗原的制备方法,其特征在于步骤如下:称取2.65mg 齐帕特罗衍生物,齐帕特罗半抗原re-ZIL与牛血清白蛋白BSA摩尔比为100:1;溶解于300μL N,N-二甲基甲酰胺中,搅拌反应10min,充分溶解后,先后加入N-羟基琥珀酰亚胺2.3mg和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐3.5mg,室温活化反应4-6h,作为A液;取6mg BSA,用2mL 

0.01M、pH为9.0的碳酸盐缓冲溶液溶解,称为B液;再逐滴将A液缓慢加入到B液中,室温偶联反应过夜;然后用0.01M PBS溶液透析,除去未反应的小分子半抗原,得到齐帕特罗完全抗原re-ZIL-EDC-BSA,并通过紫外吸收扫描方法进行鉴定。

7.权利要求2所述齐帕特罗单克隆抗体的应用,其特征在于:用于食品安全检测中齐帕特罗残留的分析检测。

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