1.一种检测大豆伴球蛋白致敏性肽段及消除大豆伴球蛋白致敏性方法,其特征在于:包括大豆伴球蛋白致敏性肽段检测和大豆伴球蛋白致敏性消除;
所述检测方法包括加热、消化酶水解、致敏性检测三个步骤,所述消除方法包括低限度水解、消化酶连续水解、致敏性测定三个步骤;
所述检测中包括如下步骤:
加热:对大豆伴球蛋白溶液进行加热;
水解1:加入胃蛋白酶、胰蛋白酶进行酶水解;
致敏性检测:进行SDS‑PAGE和ELISA分析;
所述消除中包括如下步骤:
低限度水解:大豆伴球蛋白溶液中加入碱性蛋白酶进行酶水解得到酶解液;
水解2:对低限度酶解液进行消化酶连续水解处理;
致敏性测定:进行SDS‑PAGE、ELISA分析、WesternBlot分析;
所述加热中,对大豆伴球蛋白进行加热处理的方法为将大豆伴球蛋白与去离子水混合,配制3%~7%(w/w)的大豆伴球蛋白溶液,于70~100℃加热5~40min,加热完毕后置于冰水浴中迅速冷却,4℃保存;
所述消化酶水解中,向加热得到的热处理大豆伴球蛋白溶液中添加胃蛋白酶,加酶量E/S为2%(w/w),酶解过程中维持温度37℃和pH1.5恒定,酶解30~120min后,将pH调节至中性,沸水浴灭酶10min;向加热制备所得的热处理大豆伴球蛋白溶液添加胰蛋白酶,加酶量E/S为2%(w/w),酶解过程中维持温度37℃和pH7.0恒定,酶解10~120min后,将pH调节至中性,沸水浴灭酶10min;
所述低限度水解中,将大豆伴球蛋白粉末与去离子水混合,配制3~7%(w/w)的大豆伴球蛋白溶液,添加碱性蛋白酶,加酶量E/S为0.5~2%,酶解过程中维持温度50~65℃和pH8.0~9.0恒定,酶解10~60min后,将pH调节至中性,沸水浴灭酶10min。
2.根据权利要求1所述的检测大豆伴球蛋白致敏性肽段及消除大豆伴球蛋白致敏性方法,其特征在于:所述加热中,对大豆伴球蛋白进行处理的方法为将大豆伴球蛋白与去离子水混合,配制3%(w/w)的大豆伴球蛋白溶液,于80℃加热20min,加热完毕后置于冰水浴中迅速冷却,4℃保存。
3.根据权利要求1所述的检测大豆伴球蛋白致敏性肽段及消除大豆伴球蛋白致敏性方法,其特征在于:所述消化酶水解中,向加热得到的热处理大豆伴球蛋白溶液中添加胃蛋白酶,加酶量E/S为2%(w/w),酶解过程中维持温度37℃和pH1.5恒定,酶解120min后,将pH调节至中性,沸水浴灭酶10min;向加热制备所得的热处理大豆伴球蛋白溶液添加胰蛋白酶,加酶量E/S为2%(w/w),酶解过程中维持温度37℃和pH7.0恒定,酶解60min后,将pH调节至中性,沸水浴灭酶10min。
4.根据权利要求1所述的检测大豆伴球蛋白致敏性肽段及消除大豆伴球蛋白致敏性方法,其特征在于:所述低限度水解中,将大豆伴球蛋白粉末与去离子水混合,配制3~7%(w/w)的大豆伴球蛋白溶液,添加碱性蛋白酶,加酶量E/S为0.5~2%,酶解过程中维持温度55℃和pH9.0恒定,酶解20min后,将pH调节至中性,沸水浴灭酶10min。
5.根据权利要求1所述的检测大豆伴球蛋白致敏性肽段及消除大豆伴球蛋白致敏性方法,其特征在于:所述水解2中制得的酶解液中添加胃蛋白酶,加酶量E/S为2%,酶解过程中维持温度37℃和pH1.5恒定,酶解2h后,将pH调节至7.0,添加胰蛋白酶,加酶量E/S为2%(w/w),酶解过程中维持温度37℃和pH7.0恒定,酶解10~120min后,将pH调节至中性,沸水浴灭酶10min。