1.一种粗品多糖的纯化方法,其特征在于:由以下步骤组成:
(1)洗脱浓度的确定:将红曲霉粗品多糖用去离子水配成浓度为40-50mg/mL的多糖溶液,利用阴离子交换色谱柱进行梯度洗脱,选用不同浓度的NaCl溶液为洗脱液,收集到的样品溶液以硫酸-苯酚法测定吸光度值,并以吸光度值和NaCl浓度对洗脱体积作图,确定洗脱液浓度;
(2)阴离子交换纯化:利用阴离子交换色谱柱对粗品多糖进行纯化,然后将洗脱液透析除盐、浓缩后冷冻干燥即得初步分离的多糖;
(3)凝胶柱层析:将初步分离的多糖配制成70-80mg/mL的样品溶液,上样至凝胶色谱柱,采用NH4HCO3溶液进行洗脱,洗脱液通过自动部分收集器收集,通过硫酸-苯酚法检测各管吸光度,以吸光度对洗脱体积绘制洗脱曲线,收集相应峰尖部分,反复加水减压干燥去除NH4HCO3,冷冻干燥后即得纯品多糖。
2.根据权利要求1所述的粗品多糖的纯化方法,其特征在于:步骤(1)中所述的NaCl溶液的浓度为0mol/L、0.025mol/L、0.05mol/L、0.1mol/L、0.15mol/L、0.2mol/L、0.25mol/L、
0.3mol/L、0.4mol/L、0.5mol/L和2mol/L。
3.根据权利要求1所述的粗品多糖的纯化方法,其特征在于:步骤(1)中所述的控制洗脱流速2-3mL/min,使用自动部分收集器收集,每个梯度20-25管,每管样品量为5-6mL。
4.根据权利要求1所述的粗品多糖的纯化方法,其特征在于:步骤(1)中确定的NaCl溶液的洗脱浓度为0.05-0.2mol/L。
5.根据权利要求1所述的粗品多糖的纯化方法,其特征在于:步骤(1)中所述的阴离子交换色谱柱的填料为Q-Sepharose Fast Flow。
6.根据权利要求1所述的粗品多糖的纯化方法,其特征在于:步骤(2)中所述的阴离子交换色谱柱的工作条件:柱温为室温,进样量为不超过填料质量的0.04%;所述的于MwCO3500的透析袋中透析12-18h。
7.根据权利要求1所述的粗品多糖的纯化方法,其特征在于:步骤(2)中冷冻干燥温度为-10℃至-50℃,干燥室真空度<0.11MPa,干燥时间24-28h;通过步骤(2)得到分子量为
3000-20000道尔顿的多糖的混合物。
8.根据权利要求1所述的粗品多糖的纯化方法,其特征在于:步骤(3)中所述的NH4HCO3溶液的浓度为0.2mg/mL,流速为0.25mL/min;所述的凝胶色谱柱的填料为Sephadex S-100。
9.根据权利要求1所述的粗品多糖的纯化方法,其特征在于:步骤(3)中所述的凝胶色谱柱的工作条件:柱温为室温,进样量为不超过填料质量的0.04%。
10.根据权利要求1所述的粗品多糖的纯化方法,其特征在于:步骤(3)中所述的冷冻干燥温度为-10℃至-50℃,干燥室真空度<0.11MPa,干燥时间24-28h。