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专利号: 202011014094X
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种发酵生产D-泛酸的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)活化培养:将保藏号为CCTCC NO:M2018914的大肠杆菌接种到平板培养基上活化培养,得到活化菌;

(2)种子培养:将步骤(1)得到的活化菌接种于种子培养基中进行种子培养,得到种子液;

(3)将种子液接种到发酵培养基中发酵培养生产D-泛酸,发酵时搅拌转速400-700r/min;通过搅拌和通风控制溶氧在10-25%;通过流加氨水控制pH在6.5-7.0;培养温度25.0~32.0℃;当发酵至13h时,往发酵罐中流加补料培养基,控制发酵液中葡萄糖的浓度为

0.5-2g/L,当发酵至29h时,控制发酵液中葡萄糖的浓度为4-6g/L,直至发酵结束;开始流加补料培养基后,同时往发酵罐中流加异亮氨酸水溶液,所述异亮氨酸水溶液的浓度为30-

60g/L,直至发酵结束添加的异亮氨酸的总量为30-50g。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中平板培养基为:蛋白胨10g/L、酵母膏10g/L、NaCl 5g/L、琼脂粉20g/L,pH=6.8-7.0。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)中种子培养基为:蛋白胨10g/L、酵母膏10g/L、NaCl 5g/L,pH=6.8-7.0。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中种子液接种量为发酵培养基体积的6-15%。

5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤(3)中种子液接种量为发酵培养基体积的8-12%;溶氧控制在在14-18%;通过流加氨水控制pH在6.8-7.0;培养温度控制在29.0~

31.0℃。

6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中发酵培养基为:葡萄糖15-50g/L,硫酸铵10-20g/L,酵母提取物1-4g/L,磷酸二氢钾0.5-2g/L,硫酸镁0.3-1g/L,β-丙氨酸1-

3g/L,碳酸钙5-15g/L,VB12 0.001g/L,VB1 0.001g/L,盐溶液0.5-2mL/L,丝氨酸80-200mg/L,异丙基硫代半乳糖苷0.1mmol/L;

所述盐溶液为:CuCl2 10g/L、FeSO4·7H2O 10g/L、ZnSO4·7H2O 1g/L、CuSO4 0.20g/L、NiCl2·7H2O 0.02g/L。

7.如权利要求6所述的方法,其特征在于,步骤(3)中发酵培养基为:葡萄糖18-22g/L,硫酸铵12-16g/L,酵母提取物1.5-2.5g/L,磷酸二氢钾0.6-0.8g/L,硫酸镁0.4-0.6g/L,β-丙氨酸1.2-2g/L,碳酸钙8-12g/L,VB12 0.001g/L,VB1 0.001g/L,盐溶液1mL/L,丝氨酸

100-150mg/L,异丙基硫代半乳糖苷0.1mmol/L。

8.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中补料培养基为:葡萄糖500g/L,硫酸镁8g/L,磷酸二氢钾14g/L,β-丙氨酸40g/L,硫酸铵10g/L,VB12 0.002g/L,VB1 0.005g/L,Ile 0.08g/L,丝氨酸100mg/L,盐溶液2mL,IPTG 1mmol/L;

所述盐溶液为:CuCl2 10g/L、FeSO4·7H2O 10g/L、ZnSO4·7H2O 1g/L、CuSO4 0.20g/L、NiCl2·7H2O 0.02g/L。

9.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中发酵培养过程中发酵液中葡萄糖的浓度控制策略如下:发酵前期,时间为0-13h,不控制葡萄糖浓度;

发酵中期,时间为13-29h,控制葡萄糖浓度为0.8-1.2g/L;

发酵后期,时间为29h以后,控制葡萄糖浓度为4.5-5.5g/L。

10.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中所述异亮氨酸水溶液的浓度为

35-55g/L,直至发酵结束添加的异亮氨酸的总量为34-45g。