1.一种腈水解酶突变体,其特征在于,其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.一种编码如权利要求1所述的腈水解酶突变体的基因,其特征在于,其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
3.一种包含如权利要求2所述的基因的重组质粒。
4.如权利要求3所述的重组质粒,其特征在于,原始载体为pET-28b(+)。
5.一种包含如权利要求3或4所述的重组质粒的重组工程菌。
6.如权利要求5所述的重组工程菌,其特征在于,宿主细胞为大肠杆菌Escherichia coli BL21。
7.如权利要求1所述的腈水解酶突变体在催化2-氯烟腈水解合成2-氯烟酸中的应用。
8.如权利要求7所述的应用,其特征在于,包括:以含腈水解酶突变体编码基因的重组工程菌经诱导表达后获得的湿菌体、湿菌体固定化细胞或者湿菌体超声破碎后提取的纯酶为催化剂,以2-氯烟腈为底物,以pH值6~8的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液为反应介质构成反应体系,在25~45℃下反应,反应结束后,分离纯化获得2-氯烟酸。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于,反应体系中,催化剂的用量以菌体干重计为
0.2~3g/L,底物浓度为50~500mM。
10.如权利要求9所述的应用,其特征在于,以诱导培养后收集的菌体为催化剂,pH值为
7的200mM NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液为反应介质,反应体系中,底物2-氯烟腈的浓度为300mM,菌体以干重计为2g/L,30℃下反应30~40h。