1.一种黄颡鱼混合细菌灭活疫苗,其特征在于,所述疫苗包括以下灭活抗原组合物:温和气单胞菌灭活液、恶臭假单胞菌灭活液和类志贺邻单胞菌灭活液,所述温和气单胞菌灭活液、恶臭假单胞菌灭活液和类志贺邻单胞菌灭活液的比例为1:1:1,所述温和气单胞菌灭
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活液浓度为5×10 CFU/mL,所述恶臭假单胞菌灭活液浓度为5×10 CFU/mL,所述类志贺邻8
单胞菌灭活液浓度为5×10 CFU/mL。
2.根据权利要求1所述黄颡鱼混合细菌灭活疫苗的制备方法,其特征在于,具体制备步骤如下:(1)将温和气单胞菌NN156、恶臭假单胞菌NN157和类志贺邻单胞菌NN159分别接种在普通琼脂培养基上,28 ℃恒温培养16 h 24 h后;
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(2)分别挑取3种细菌的单菌落置于营养肉汤培养基中,在28 ℃条件下200 rpm培养过
8‑12 h;
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(3)当细菌浓度达到0.8 1.5×10 CFU/mL时,于菌液中加入福尔马林至终浓度为0.5%,~所述的浓度为体积比浓度,25 ℃灭活24 h后,期间每隔6 h充分搅动1次菌液;
(4)将已灭活的菌液在4℃、5000 rpm条件下离心10 15 min收集菌体沉淀,再用0.65%~8
无菌生理盐水洗涤并重悬3次,使用细菌浊度仪将灭活疫苗浓度调至为5×10 CFU/mL;
(5)将3种细菌的灭活疫苗按1:1:1的比例混匀后分装并置于4 ℃冰箱保存备用。