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专利号: 2020112319352
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-08-12
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种南极磷虾肽螯合钙的制备方法,包括:

S1:按照质量体积比为1:10g/mL取南极磷虾金属螯合肽,溶于水中,加入氯化钙,其中南极磷虾金属螯合肽与氯化钙的质量比为1:5,在60℃、pH为7、160rpm条件下反应50min,得到A溶液;

S2:向上述A溶液中加入乙醇,搅拌均匀,去除未结合的钙离子,10000rpm离心5min,取出沉淀真空冷冻干燥即得南极磷虾肽螯合钙;其中,真空冷冻干燥第一阶段预冷温度为40℃,2h;第二阶段抽真空段温度为‑40℃压强0Pa,2h;第三阶段冻干在25℃、压强0Pa的条件下进行,36h;

所述南极磷虾金属螯合肽的制备方法,包括:

酶解,取南极鳞虾粉按料液比1:15g/mL加入水混合均匀,用0.5M HCl调节溶液pH至

8.0,然后加入胰蛋白酶,加入量为总溶液的3%,40℃酶解4h,100℃加热灭酶10min,

4000rpm离心15min后取上清液得到酶解液;该条件它的水解度为23.75±0.22%;

分离纯化,将上述酶解液经超滤膜包,将小于1.0kDa的组分过DEAE‑52离子交换层析、SepHadex G‑25凝胶过滤层析后得到南极磷虾金属螯合肽;具体为:

DEAE‑52离子交换层析:经过超滤将小于1.0kDa组分配置成50mg/mL的样品液,并将溶液组分以12000r/min离心20min,后取其上清过0.45μm微滤膜,以充分除去不溶性杂质;取

6mL样品并通过恒流泵恒流上样;最后依次按照Tris‑HCl缓冲液、含0.1M NaCl的Tris‑HCl缓冲液、含0.25M NaCl的Tris‑HCl缓冲液、含0.5M NaCl的Tris‑HCl缓冲液、含1M NaCl的Tris‑HCl缓冲液逐级洗脱;每个浓度洗脱体积为400mL,洗脱流速为3mL/min,脱出3个峰,分别命名为k1、k2、k3;并在214nm紫外波长下收集出峰组分,测钙螯合率,k1组分的螯合活性高于k2、k3;将所得到的单峰组分进行旋蒸浓缩后,进行下一步实验;

SepHadex G‑25凝胶过滤层析:将过DEAE‑52离子柱的3个组分,以0.3mL/min流速、

10min/管进行脱盐及分离,洗脱液为去离子水,并在214nm紫外波长下收集各出峰组分,k1经SepHadex G‑25纯化得到k12组份,即为南极磷虾金属螯合肽。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述南极磷虾金属螯合肽的钙螯合率>60%。

3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述南极磷虾肽螯合钙具有抗氧化活性。

4.一种南极磷虾肽螯合铁的制备方法,包括:

S1:按照质量体积比为1:10g/mL取权利要求1中所述的南极磷虾金属螯合肽,溶于水中,加入FeSO4·4H2O,其中南极磷虾金属螯合肽与FeSO4·4H2O的质量比为1:15,再加入Na2S2O4至终浓度为100mM,防止亚铁离子氧化,在50℃、pH为7、160rpm条件下反应5h,得到A溶液;

S2:向上述A溶液中加入乙醇,搅拌均匀,去除未结合的钙离子,10000rpm离心5min,取出沉淀真空冷冻干燥即得南极磷虾肽螯合钙;其中,真空冷冻干燥第一阶段预冷温度为40℃,2h;第二阶段抽真空段温度为‑40℃压强0Pa,2h;第三阶段冻干在25℃、压强0Pa的条件下进行,36h。

5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于:所述南极磷虾金属螯合肽的铁螯合率>60%。

6.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于:所述南极磷虾肽螯合铁具有抗氧化活性。

7.权利要求1所述制备方法制得的南极磷虾肽螯合钙或权利要求4所述制备方法制得的南极磷虾肽螯合铁在制备保健品、药物中的应用。