1.一种从Nigella sativa种籽中分离提取糖及糖类衍生物的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)以干燥的Nigella sativa种籽为原料,粉碎后用石油醚脱脂,残渣挥干石油醚,用
60-80%乙醇提取,提取液减压回收溶剂,得到提取物浸膏;
2)将提取物浸膏用甲醇溶解,拌样于硅胶柱,用体积比为20:1、15:1、10:1、5:1、3:1、1:
1的二氯甲烷-甲醇对硅胶柱进行梯度洗脱,硅胶薄层色谱检测合并,得到7个组分,按照所得组分极性由小到大依次标记为Fr1-Fr7;
3)第3个组分Fr3经反相柱色谱分离,以体积比为40:60、50:50、60:40、70:30、80:20、
90:10、100:0的甲醇-水溶液梯度洗脱,硅胶薄层色谱检测合并,得到8个组分,按照所得组分极性由小到大依次标记为3-1 3-8;
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4)组分3-1经硅胶柱色谱分离,以体积比为10:1、8:1、5:1、3:1、1:1的乙酸乙酯-甲醇进行梯度洗脱,硅胶薄层色谱检测合并,得到2个组分,按照所得组分极性由小到大依次标记为3-1-1和3-1-2;
5)组分3-1-2经Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱,以体积比1:1的二氯甲烷-甲醇洗脱,再经硅胶柱色谱分离,以体积比为8:1、5:1、3:1、1:1的乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱,硅胶薄层色谱检测合并,得到2个亚组分,按照所得组分极性由小到大依次标记为3-1-2a和3-1-
2b,组分3-1-2a为α-D-呋喃果糖粗品;组分3-1-2b经反相柱色谱分离,以体积比15:85的甲醇-水等度洗脱,得到乙基-β-D-呋喃果糖粗品;
组分3-1-1经Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱分离,以体积比1:1的二氯甲烷-甲醇洗脱,再经反相柱色谱分离,以体积比为15:85、20:80、30:70、60:40、90:10的甲醇-水溶液梯度洗脱,得到乙基-α-D-吡喃半乳糖粗品。
2.如权利要求1所述从Nigella sativa种籽中分离提取糖及糖类衍生物的方法,其特征在于,步骤5)所得α-D-呋喃果糖粗品用甲醇溶解,经Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离,以甲醇洗脱,得α-D-呋喃果糖纯品。
3.如权利要求1所述从Nigella sativa种籽中分离提取糖及糖类衍生物的方法,其特征在于,步骤5)所得乙基-α-D-吡喃半乳糖粗品用甲醇溶解拌样于硅胶,再经硅胶柱色谱分离,以体积比为8:1、5:1、3:1、1:1的乙酸乙酯-甲醇进行梯度洗脱,得乙基-α-D-吡喃半乳糖纯品。
4.如权利要求1所述从Nigella sativa种籽中分离提取糖及糖类衍生物的方法,其特征在于,步骤5)所得乙基-β-D-呋喃果糖粗品用甲醇溶解,经Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离,以甲醇洗脱,得乙基-β-D-呋喃果糖纯品。
5.如权利要求1所述从Nigella sativa种籽中分离提取糖及糖的衍生物类化合物的方法,其特征在于,步骤1)中,石油醚脱脂2-4次,每次脱脂时间为2-4天,干燥Nigella sativa种籽与石油醚的料液添加比为5kg:6-10L。
6.如权利要求1所述从Nigella sativa种籽中分离提取糖及糖的衍生物类化合物的方法,其特征在于,步骤1)中,用70%乙醇冷浸提取3次,每次3天;残渣与70%乙醇的料液添加比为5kg:6-10L。