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专利号: 2020113384414
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种甾体C1,2位脱氢酶酶活检测方法,所述方法包括:(1)将适量甾体C1,2位脱氢酶底物与吩嗪硫酸甲酯、WST‑1检测试剂混于缓冲液中;

(2)称取WST‑1,加入95%酒精助溶,蒸馏水定容配制成0.4%的WST‑1溶液,避光保存;

吸取0.4%的WST‑1溶液于容量瓶,加入Na2S2O4粉末,摇匀后再用乙酸乙酯定容至刻度;分别取0.25mL、0.5mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL于10mL容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到TF25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列,以空白作为参比,在440nm下测定萃取液吸光度,绘制标准曲线;

(3)将含甾体C1,2位脱氢酶的待测溶液加入缓冲溶液,混合均匀,置于甾体C1,2位脱氢酶最适反应温度和最适反应pH值下反应1~4小时,检测440nm的吸光度;

(4)对照甾体C1,2位脱氢酶标准曲线,计算得到待测溶液中甾体C1,2位脱氢酶浓度。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于甾体C1,2位脱氢酶底物与助溶剂混合后再添加至缓冲液中,所述助溶剂为下列之一:DMSO、DMF、吐温80、乙醇。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于反应液中甾体C1,2位脱氢酶底物浓度为10~

100mM,吩嗪硫酸甲酯的浓度为5~25μM,WST‑1的浓度为10~100mM。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述甾体C1,2位脱氢酶底物为雄烯二酮。

5.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述甾体C1,2位脱氢酶最适反应温度为30℃~40℃,最适反应pH值为8.0~10.0。

6.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述含甾体C1,2位脱氢酶的待测溶液为含甾体C1,2位脱氢酶的菌液,来自放线菌门、变形菌门或厚壁菌门。