1.一种甾体C1,2位脱氢酶酶活检测方法,所述方法包括:(1)将适量甾体C1,2位脱氢酶底物与吩嗪硫酸甲酯、WST‑1检测试剂混于缓冲液中;
(2)称取WST‑1,加入95%酒精助溶,蒸馏水定容配制成0.4%的WST‑1溶液,避光保存;
吸取0.4%的WST‑1溶液于容量瓶,加入Na2S2O4粉末,摇匀后再用乙酸乙酯定容至刻度;分别取0.25mL、0.5mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL于10mL容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到TF25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列,以空白作为参比,在440nm下测定萃取液吸光度,绘制标准曲线;
(3)将含甾体C1,2位脱氢酶的待测溶液加入缓冲溶液,混合均匀,置于甾体C1,2位脱氢酶最适反应温度和最适反应pH值下反应1~4小时,检测440nm的吸光度;
(4)对照甾体C1,2位脱氢酶标准曲线,计算得到待测溶液中甾体C1,2位脱氢酶浓度。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于甾体C1,2位脱氢酶底物与助溶剂混合后再添加至缓冲液中,所述助溶剂为下列之一:DMSO、DMF、吐温80、乙醇。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于反应液中甾体C1,2位脱氢酶底物浓度为10~
100mM,吩嗪硫酸甲酯的浓度为5~25μM,WST‑1的浓度为10~100mM。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述甾体C1,2位脱氢酶底物为雄烯二酮。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述甾体C1,2位脱氢酶最适反应温度为30℃~40℃,最适反应pH值为8.0~10.0。
6.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述含甾体C1,2位脱氢酶的待测溶液为含甾体C1,2位脱氢酶的菌液,来自放线菌门、变形菌门或厚壁菌门。