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专利号: 2020113447610
申请人: 江苏海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于鉴定龙须菜性别的引物,其特征在于:所述的引用为SEQIDNO.1和SEQIDNO.2;其序列如下:引物名称 序列(5’ to 3’)

SEQIDNO.1 CTTGTTTCCCTGCATTGTATTSEQIDNO.2 CTCACGCAGAAATGAGGTCTA。

2.一种采用权利要求1所述的引物进行龙须菜性别鉴定的方法,其特征在于,其步骤如下:S1、提取龙须菜单倍体的DNA;

S2、以步骤S1中提取的DNA为模板,使用引物SEQIDNO.1和SEQIDNO.2进行PCR扩增;S3、PCR产物进行琼脂糖检测,根据条带的有无差异,判断龙须菜单倍体的性别。

3.根据权利要求2所述的龙须菜性别鉴定的方法,其特征在于,步骤(1)的具体方法如下:采用离心柱型植物基因组DNA试剂盒法,提取龙须菜总DNA,步骤为:称取0.05 0.10 g新~鲜材料,液氮研磨后,转移至预装装有700 μl且含0.1% β-巯基乙醇的预热裂解缓冲液的离心管,混匀后65 ℃水浴30 min,待裂解完成,加入700 μl氯仿抽提,12,000 *g离心5 10 ~min,收集上层液加入700 μl的抽提缓冲液,混匀后转移至DNA吸附柱中,12,000 *g离心1 min,去废液;向吸附柱中移入500 μl含乙醇的GD缓冲液,12,000 *g离心1 min,去废液;向吸附柱中加入600 μl含乙醇的漂洗液,12,000 *g离心1 min,去废液;重复一漂洗,去废液,

12,000 *g离心2 min,室温放置至酒精完全挥发后,转入干净的EP管内;向吸附柱内悬空滴加100 μl的TE洗脱缓冲液,静置5 min,12,000 *g离心2 min,-20 ℃保存离心洗脱液,即为龙须菜总的DNA。

4.根据权利要求2所述的龙须菜性别鉴定的方法,其特征在于,步骤(2)的具体方法如下:利用引物SEQIDNO.1和SEQIDNO.2,对已知性别的龙须菜雌雄配子体基因组和龙须菜四分孢子体空白对照进行扩增;反应体系:Taq DNA Polymerase  0.1 µl;

10× Taq Buffer with KCl  2 µl;

25 mMMgCl2  1.2 µl;

dNTP Mix  2 µl;

10 µM SEQIDNO.1  1 µl;

10 µM SEQIDNO.2  1 µl;

DNA  1 µl;

加ddH2O至总体系 20 µl;

反应条件为: 94 ℃ 10min;94 ℃ 30s,63 ℃ 30s,72 ℃ 1min,30个循环;72 ℃ 10 min;4 ℃保存。

5.根据权利要求2所述的龙须菜性别鉴定的方法,其特征在于,步骤(3)的具体方法如下:取4 μl PCR扩增产物,在1%的琼脂糖凝胶上电泳30 min,通过凝胶成像仪记录结果;电泳结果中,有条带且条带大小为1000bp表示个体性别为雌性;无条带表示此个体性别为雄性。