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专利号: 2020113670384
申请人: 华侨大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种低速离心纯化重组木聚糖酶的方法,其特征在于:包括如下步骤:(1)将依次相连的木聚糖酶的基因片段和铁蛋白的基因片段插入pET‑22b(+)质粒载体中,构建形成pET‑Xyl‑Ferritin,其中,木聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.01所示,铁蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.02所示;

(2)将步骤(1)所得的pET‑Xyl‑Ferritin转入大肠杆菌中,制成工程菌;

(3)将步骤(2)所得的工程菌在LB培养基中活化后,于TB培养基中扩大培养,再加入IPTG诱导表达,获得培养液;

(4)将步骤(3)所得的培养液经离心后,获得第一沉淀,再加入PBS重悬洗涤,获得菌体;

(5)将步骤(4)所得的菌体进行超声破碎;

(6)将步骤(5)所得的物料于pH=7‑8且10‑35℃的条件下静置10‑30min;

(7)将步骤(6)所得的物料于500‑2800g离心5‑15min,获得第二沉淀,即成。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述木聚糖酶的基因片段的序列如SEQ ID NO.03所示。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述铁蛋白的基因片段的序列如SEQ ID NO.04所示。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述木聚糖酶的基因片段的序列如SEQ ID NO.03所示,所述铁蛋白的基因片段的序列如SEQ ID NO.04所示。

5.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法,其特征在于:所述大肠杆菌为E.coil BL21(DE3)。

6.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法,其特征在于:所述步骤(2)的活化为培养至OD600=0.6‑1.0。

7.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法,其特征在于:所述步骤(2)的扩大培养的温度为37℃,200rpm摇床培养3‑4h,接种量为1∶100。

8.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法,其特征在于:所述超声破碎的条件为:超声2s,停2s,如此循环80次。

9.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法,其特征在于:所述步骤(6)为:将步骤(5)所得的物料于pH=7.5且35℃的条件下静置20min。

10.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法,其特征在于:所述步骤(7)为:将步骤(6)所得的物料于2000g离心5min,获得第二沉淀,即成。