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专利号: 2020113776726
申请人: 东北林业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于CRISPR/Cas9的白桦基因编辑方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)靶基因sgRNA序列的获取和合成,

(2)CRISPR/Cas9表达载体的构建,

(3)根癌农杆菌瞬时侵染白桦,

(4)工程菌液转化白桦外植体,获取CRISPR/Cas9编辑的稳定遗传转化植株,所述靶基因sgRNA为白桦BpPDS和BpUVR8靶基因sgRNA序列,序列分别如下:T‑P:5’‑CATATGCGGATGTGTTTCCGCGG‑3’;

T‑1:5’‑CAGCCAATCAAAGCATTAAATGG‑3’。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中,培养三周的白桦组培幼苗经

25%蔗糖溶液高渗处理后,无菌水冲洗30s,吸干表面液体,使用OD600为0.5的农杆菌工程菌LBA4404‑pU3b::BpPDS/BpUVR8菌液、添加200uM乙酰丁香酮后,浸没幼苗植株,转速60rmp,温度25℃,培养时间72h。

3.根据权利要求1所述方法,其特征在于,遗传转化白桦植株培养基配方:选择分化培养基为WPM+0.8mg/L6‑BA+0.2mg/LNAA+5.0mg/LHYG+500mg/LCef,出芽培养基为WPM+2.0mg/L6‑BA+5.0mg/LHYG+500mg/LCef,生根培养基为WPM+0.5mg/LIBA+4.0mg/LHYG+500mg/LCef。