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专利号: 2020114709413
申请人: 丽水学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用SSR引物鉴定西兰花品种的方法,包括48份西兰花品种,其特征是:利用分散在西兰花9对染色体上的28对核心SSR引物组合对西兰花品种的真实性进行鉴定的SSR分子标记技术,主要包括有西兰花核心SSR引物的筛选、西兰花品种指纹图谱库的构建和西兰花品种的SSR鉴定方法;

所述西兰花品种的SSR鉴定方法包括DNA指纹图谱库法或对照品种对比法两种方案,利用所述28对核心SSR引物组合扩增获得西兰花品种的DNA指纹信息数据,根据DNA指纹图谱库法或对照品种比对法对待测品种的真实性进行鉴定;

所述分散在西兰花9对染色体上的28对核心SSR引物组合包括BoGMS1162、BoE041、Na10H03c、BoSF239、BoSF2725、BoGMS0665、BnEMS0287、CB10057、BoE718、MR049B、BRMSo71、CB10288、BoE891、BoSF259、BoGMS0949、CB10526、CB10234、Na12A02、BoE723、BoE875、OL11Bo5、CNU400、CB10028、CB10139、CB10064、BoSF2206、BoSF2686、BoGMS0847;

所述DNA指纹图谱库法的主要步骤如下:

步骤1、利用试剂盒法提取待鉴定西兰花品种的基因组DNA;

步骤2、以28对核心SSR引物对其进行PCR扩增,利用荧光电泳分型检测平台分析该品种在28个扩增位点的扩增信息,以品种编号、扩增位点名称以及“0”、“1”阵列为基础表征该品种的指纹信息数据;

步骤3、将待鉴定品种的DNA指纹信息数据与48份西兰花品种的DNA指纹图谱库进行搜索比对,若待鉴定品种的DNA指纹信息数据与西兰花DNA指纹图谱库中的某个品种信息一致,则可判断待鉴定品种与指纹图谱库中的该品种为同一品种;若待鉴定品种的DNA指纹信息数据与西兰花DNA指纹图谱库中的48份西兰花品种的指纹信息均不一致,则可判断待鉴定品种不属于48份西兰花品种中的任一品种;

所述对照品种对比法的主要步骤如下:

步骤1、利用试剂盒法分别提取待鉴定西兰花品种与对照品种的基因组DNA;

步骤2、以28对核心SSR引物对两者进行PCR扩增,利用荧光电泳分型检测平台分析待鉴定品种与对照品种在28个扩增位点的扩增信息,以品种编号、扩增位点名称以及“0”、“1”阵列为基础表征待鉴定品种与对照品种的指纹信息数据;

步骤3、将待鉴定品种与对照品种的DNA指纹信息数据进行比较,若两者的指纹信息数据相同,则可判定待鉴定品种与对照品种为相同品种;若两者的指纹信息数据不同,则判定待鉴定品种与对照品种为不同品种;

48份西兰花品种信息如下:

48份西兰花品种的DNA指纹图谱,包含10个扩增位点,信息如下:

48份西兰花品种的DNA指纹图谱库,信息如下:。

2.根据权利要求1所述的一种利用SSR引物鉴定西兰花品种的方法,其特征是:所述西兰花核心SSR引物的筛选的主要步骤如下:

步骤1、按照芸薹属SSR数据库网站提供的芸薹属引物信息合成SSR引物875对,作为备选SSR引物;

步骤2、以12份遗传差异性较大的西兰花品种作为筛选材料,利用试剂盒法从12份西兰花种子中提取基因组DNA;

步骤3、采用降落式PCR程序,以875对引物对12份西兰花筛选材料进行扩增,通过6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合硝酸银快速染色法进行检测,从中初步筛选出扩增带型清晰、多态性丰富的候选核心引物;

步骤4、采用荧光PCR,以步骤3中的候选核心引物对48份西兰花品种材料进行扩增,通过荧光电泳分型检测平台,从候选核心引物中进一步复筛得到最终的核心SSR引物。

3.根据权利要求2所述的一种利用SSR引物鉴定西兰花品种的方法,其特征是:所述西兰花品种指纹图谱库的构建的主要步骤如下:

步骤1、利用试剂盒法从48份西兰花品种种子中提取相应的基因组DNA,利用DNA分析仪检测其纯度及浓度,并稀释至合适浓度;

步骤2、以28对核心SSR引物对48份西兰花品种基因组DNA进行PCR扩增,利用荧光电泳分型检测平台分析48份西兰花品种的材料在28个扩增位点的扩增信息;

步骤3、以西兰花品种编号、扩增位点名称以及“0”、“1”阵列为基础构建48份西兰花品种的指纹图谱库,其中“0”代表在相应扩增位点无扩增条带,“1”代为在相应扩增位点有扩增条带,每一西兰花品种均有包含28个位点信息的指纹代码,具有唯一性,每一个指纹代码可作为一个品种的标识。

4.根据权利要求2所述的一种利用SSR引物鉴定西兰花品种的方法,其特征是:所述步骤3中的丙烯酰胺凝胶的配制方法为取16ml水、6ml5XTBD、8ml丙烯酰胺、300μl过硫酸铵、10μlTEMED溶液配制聚丙烯酰胺胶液,吹打混匀,防止气泡的产生,配制好所需要的非变性聚丙烯酰胺凝胶试剂后,制作胶板并进行电泳银染检测。

5.根据权利要求1所述的一种利用SSR引物鉴定西兰花品种的方法,其特征是:所述48份西兰花品种的品种编号为Bro‑1,Bro‑2,Bro‑3,Bro‑4,Bro‑5,Bro‑6,Bro‑7,Bro‑8,Bro‑

9,Bro‑10,Bro‑11,Bro‑12,Bro‑13,Bro‑14,Bro‑15,Bro‑16,Bro‑17,Bro‑18,Bro‑19,Bro‑

20,Bro‑21,Bro‑22,Bro‑23,Bro‑24,Bro‑25,Bro‑26,Bro‑27,Bro‑28,Bro‑29,Bro‑30,Bro‑

31,Bro‑32,Bro‑33,Bro‑34,Bro‑35,Bro‑36,Bro‑37,Bro‑38,Bro‑39,Bro‑40,Bro‑41,Bro‑

42,Bro‑43,Bro‑44,Bro‑45,Bro‑46,Bro‑47,Bro‑48。