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专利号: 2020114874603
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于纳米酶检测组蛋白乙酰转移酶的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:

a、CuBi2O4纳米材料的合成:将每1.0mmol Bi(NO3)3·5H2O分散在20mL含有0.7mL浓硝酸的水溶液中,搅拌2h直至溶液澄清透明;在搅拌状态下将10mL 0.05mol/L的Cu(NO3)2·3H2O水溶液加入上述澄清溶液中;随后在持续搅拌下逐滴加入15mL 1.0mol/L的NaOH水溶液,直至溶液变成蓝绿色沉淀;将最终的混合物转移到特氟龙内衬的不锈钢高压釜中并在140℃下加热14h;产物用乙醇和水交替洗涤六次,并在60℃下真空干燥过夜,最终得到的产物为棕色粉末;

b、HAT p300的测定:将每20μL不同浓度的HAT p300、20μL 1.0mmol/L的乙酰辅酶A和20μL 1.0mmol/L的底物肽RGKGGKGLGKGGAKA混合并在30℃下孵育80min;孵育结束后向其中加入20μL 0.1mmol/L的辅酶A适配体溶液,室温下孵育过夜;孵育结束后再向其中加入20μL 

5.0U/mL的限制性核酸外切酶I溶液,37℃下孵育60min;孵育结束后向混合溶液中加入20μL 

1.0mg/mL的CuBi2O4溶液,孵育5min;最后,向混合溶液中分别加入20μL 0.1mmol/L的K4[Fe(CN)6]、20μL 5.0mmol/L的纳米材料模拟酶的特征显色底物3,3',5,5'‑四甲基联苯胺、38μL 0.4mol/L pH=4.0的NaAc/HAc缓冲溶液以及20μL 1.0mmol/L H2O2,在35℃下孵育15min后,使用酶标仪进行光谱扫描,获得不同浓度样品在最大波长652nm处的吸光度值,计算得到不同浓度下的吸光度增值A‑A0,其中A为该浓度下的吸光度值;A0为浓度为0时的吸光度值;

c、构建线性测定模型:利用HAT p300的浓度与吸光度增值A‑A0构建线性关系,得到测定模型。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法还包括:按照步骤b对待测样品进行孵育处理,测得相应的吸光度增量;然后通过步骤c的线性测定模型,计算得到待测样品中HAT p300的浓度含量。