1.一种黄蜀葵花多糖的温和脱色方法,其特征在于:包括以下步骤:S1选取黄蜀葵的花冠部位,干燥粉碎,筛分,取筛分后细粉,得到黄蜀葵花冠粉,随后置于干燥处待用;
S2按照质量比黄蜀葵花冠粉:丙酮=1:6‑1:8,将黄蜀葵花冠粉浸泡入丙酮中12‑24 h,随后干燥,再按照质量比黄蜀葵花冠粉:无水乙醇=1:4‑1:6,将黄蜀葵花冠粉浸泡入无水乙醇中6 12 h,取出黄蜀葵花冠粉进行通风干燥,通风干燥后,将干燥后的黄蜀葵花冠粉烘~干,得到脱脂黄蜀葵花冠粉末;
S3将脱脂黄蜀葵花冠粉末按照料液比为1:20与超纯水溶液混合后,升温提取,随后降低温度,取反应后溶液离心,收集上清液,同时将沉淀物与超纯水混合,按照上述过程,提取
2 3次,合并多次提取的上清液,蒸发浓缩至原体积的1/3‑1/4后,按照体积比为浓缩液:质~量分数为95%的乙醇=1:4,沉淀浓缩液12‑24h,沥干乙醇后,离心,加入少量的双蒸水重复溶解,于4℃保存,得到保存液;
S4将得到的保存液,调节pH为9‑10,加入固体CaCl2至终浓度5%,水浴加热后冷却至室温,过滤,稀盐酸调节至中性,随后按照四倍的溶液体积加入质量分数为95%的乙醇进行沉淀,重复沉淀2‑3次,沉淀复溶,得到混合液,针对混合液进行260nm和280 nm紫外光谱分析扫描,判断是否存在蛋白吸收峰,若存在,返回并执行S4,若不存在,执行步骤S5;
S5将混合液用截留分子量3500 Da的透析袋透析,减压低温浓缩至原始体积的1/2 1/~
4,冻干透析后液体,得到粗制多糖粉末;
S6将粗制多糖粉末加入到100 200 mL的0.05 0.6 mol的乙二胺四乙酸二钠,磁力搅拌~ ~
30 60 min,随后减压浓缩至原始体积的1/3 1/5,低温保存,得到多糖保存液,将多糖保存~ ~液依次经过树脂净化处理,减压浓缩,得到多糖浓缩液;
S7将多糖浓缩液通过中空纤维超滤膜过滤,弃去外层溶液,保留截留多糖组分,然后减压浓缩至原体积的1/3~1/4,得到多糖液,随后低温冻干成粉,即得到脱色后的黄蜀葵花多糖粉,并计算得到的黄蜀葵花多糖粉的成分含量;
所述的树脂净化处理包括以下步骤:
a.将多糖保存液分别反复经过AB‑8大孔吸附树脂、732强酸型阳离子交换树脂、D113弱酸性阳离子交换树脂、717强碱性阴离子交换树脂以及D301弱碱性阴离子交换树脂层析系统处理;
b.再利用具备示差检测器的凝胶渗透色谱在线检测多糖组分,将各个树脂的多糖组分分别富集后,编号,减压浓缩,计算脱色率;
c.根据脱色率排序,筛选最合适的树脂;
其中,所述最合适的树脂为732强酸型阳离子交换树脂。
2.根据权利要求1所述的一种黄蜀葵花多糖的温和脱色方法,其特征在于:所述的脱色率为:其中,所述的脱色前吸光度为,采用粗制多糖粉末与超纯水配制成1 mg/mL的脱色检测前样品溶液的吸光度,或利用多糖保存液与超纯水配制成1 mg/mL的脱色检测前样品溶液的吸光度;
所述的脱色后吸光度为,采用多糖保存液与超纯水配制成1 mg/mL的脱色检测后样品溶液的吸光度,或利用多糖浓缩液与超纯水配制成1 mg/mL的脱色检测后样品溶液的吸光度;
所有溶液的吸光度均采用紫外可见分光光度计于420nm波长测定的吸光度值。
3.根据权利要求2所述的一种黄蜀葵花多糖的温和脱色方法,其特征在于:所述的脱色率包括乙二胺四乙酸二钠脱色率、树脂脱色率以及总脱色率;
所述的乙二胺四乙酸二钠脱色率为:
其中,所述的脱色前吸光度为粗制多糖粉末与超纯水配制成1 mg/mL的脱色检测前样品溶液的吸光度,所述的脱色后吸光度为采用多糖保存液与超纯水配制成1 mg/mL的脱色检测后样品溶液的吸光度;
所述的树脂脱色率为:
其中,所述的脱色前吸光度为多糖保存液与超纯水配制成1 mg/mL的脱色检测前样品溶液的吸光度,所述的脱色后吸光度为多糖浓缩液与超纯水配制成1 mg/mL的脱色检测后样品溶液的吸光度;
所述的总脱色率为:
其中,所述的脱色前吸光度为粗制多糖粉末与超纯水配制成1 mg/mL的脱色检测前样品溶液的吸光度,所述的脱色后吸光度为多糖浓缩液与超纯水配制成1 mg/mL的脱色检测后样品溶液的吸光度。
4.根据权利要求1‑3任一项所述的一种黄蜀葵花多糖的温和脱色方法,其特征在于:所述的成分含量包括多糖含量、多糖保留率以及多糖结构组分测定。
5.根据权利要求4所述的一种黄蜀葵花多糖的温和脱色方法,其特征在于:所述的多糖含量通过以下步骤测定:
1)将黄蜀葵花冠粉配制成1 mg/mL的脱色前样品溶液,同时将制备的黄蜀葵花多糖粉配制成1 mg/mL的脱色后样品溶液,溶剂均采用超纯水;
2)将20 ml浓硫酸缓慢加入到100 ml的水中,待冷却至室温,加入1g的苯酚溶解得到显色液;
3)将得到的脱色前样品溶液和脱色后的样品溶液分别取0.5ml,分别加入到2 ml的显色液中,混合均匀后水浴加热,随后流水冷却,得到以脱色前样品溶液为主要成分的对比组,以及以脱色后的样品溶液为主要成分的实验组,将对比组和实验组均在于紫外分光光度计的490nm波长处测定吸收度值,并以葡萄糖为标准品绘制的标准曲线为参考,计算对比组和实验组的多糖含量,即得到多糖含量。
6.根据权利要求5所述的一种黄蜀葵花多糖的温和脱色方法,其特征在于:所述的多糖保留率为:
7.根据权利要求5所述的一种黄蜀葵花多糖的温和脱色方法,其特征在于:所述的多糖结构组分测定包括多糖特征结构变化和单糖组成变化;
所述的多糖结构变化具体为以下步骤:
(1)配制浓度为0.5 mg/ml的黄蜀葵花多糖粉的溶液,同时配制0.5 mg/ml的葡聚糖系列溶液,溶剂均采用超纯水;所述的葡聚糖系列包括葡萄糖、T10、T40、T70、T100、T200以及T500;
(2)利用配制的0.5 mg/ml的葡聚糖系列溶液为标准品进行标准曲线的绘制,采用高效凝胶渗透色谱对黄蜀葵花多糖的相对分子质量的测定,以超纯水作为流动相,柱温30℃,流速为0.3 ml/min,测定多糖结构的相对分子质量;
(3)利用傅里叶变换红外光谱仪FT‑IR测定脱色前样品溶液和脱色后样品溶液的多糖特征结构,判定是否存在变化;
所述的单糖组成变化为,使用PMP柱前衍生化反应测定脱色前样品溶液和脱色后样品溶液的单糖组成,根据两者单糖组成的图谱,判定单糖组成变化。