欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13095918853 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13095918853
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2021100156217
申请人: 浙江理工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种用于探究古代丝绸微生物劣化机理的老化丝绸样和老化样液的制备方法,其特征在于包括如下步骤:(1)样品采集:选取丝绸文物遗址地劣化丝绸文物表层1‑2cm的土壤,并同时用无菌拭子在丝绸文物表面沿单一方向轻轻擦拭,将带菌试子和土壤两者装入灭菌容器中;在容器中加入无菌磷酸盐缓冲液,35‑40℃下恒温振荡20‑30min,使微生物分散均匀,得到微生物菌液;

(2)梯度稀释:用无菌吸管吸取步骤(1)所得微生物菌液加入盛有无菌水的试管中充分‑1 ‑2 ‑3 ‑4 ‑5 ‑6混匀,以此为10 稀释液,以此类推分别制成10 、10 、10 、10 、10 稀释度的菌液;

‑4 ‑5 ‑6

(3)涂布培养:用无菌吸管从步骤(2)所得10 、10 、10 三种稀释度的菌液中分别各准确吸取部分至细菌平板、真菌平板和放线菌平板中央,用无菌玻璃棒在平板表面涂布均匀后将细菌平板倒置于35‑40℃恒温培养箱培养1‑2d,真菌平板和放线菌平板倒置于25‑30℃恒温培养箱中5‑7d;

所述细菌平板制备方法为:1‑1.5%丝素蛋白、NaCl 5‑7g、柠檬酸钠5‑7g、琼脂1.5‑2%、Na2HPO4·12H2O 2.5‑4g、水1000mL,pH=7.4‑7.6;121℃灭菌21min;

所述放线菌平板制备方法为:1‑1.5%丝素蛋白、NaCl 0.5‑0.7g、KNO3 1g、K2HPO4·3H2O 

0.5‑0.7g,MgCl4·7H2O 0.5‑0.7g,FeCl4·7H2O 0.01‑0.02g,琼脂1.5‑2%,苯酚 1.5%,水

1000mL,pH=7.4‑7.6;121℃灭菌21min;

所述真菌平板制备方法为:1‑1.5%丝素蛋白,KH2PO4 1‑1.5g,MgCl4·7H2O 0.5‑0.7g,琼脂1.5‑2%,1%孟加拉红溶液3.3‑3.5mL,水1000mL,pH自然;121℃灭菌21min,培养基待冷却到45‑50℃再加入1%链霉素液3‑3.2mL;所述细菌恒温培养时间为1‑2d,真菌和放线菌恒温培养时间为5‑7d;

(4)划线分离:挑选经涂布培养后平板上的优势单菌落若干个对应接种在三种平板的斜面上,分别置于25‑30℃和35‑40℃恒温培养箱中培养至菌苔长出后,检查其特征是否一致,同时将细胞涂片染色后用显微镜检查是否为单一的微生物细胞,若发现有杂菌,须再次进行分离纯化,得到若干个纯培养物;

(5)降解丝绸微生物的筛选:取0.8‑1g现代丝织品并剪碎,并将剪碎所得丝绸碎片添加至细菌平板Ⅰ、真菌平板Ⅱ和放线菌平板Ⅲ中,将步骤(4)挑选的若干个纯培养物对应接种在含有丝绸碎片的三种平板中,观察各个纯培养物的生长情况;多次重复直到筛选出在以丝绸碎片为唯一碳源、氮源的三种平板中生长情况良好的细菌A、真菌B、放线菌C;

所述丝绸碎片为每块平板0.8‑1g;所述细菌平板Ⅰ制备方法为细菌平板制备方法中不加丝素蛋白;所述真菌平板Ⅱ为真菌平板制备方法中不加丝素蛋白;所述放线菌平板Ⅲ为放线菌平板制备方法中不加丝素蛋白;

(6)老化丝绸样和老化样液制备:将现代丝织品剪成丝绸条,经酒精浸泡后用去离子水冲洗多遍,再放入烘箱至烘干;将步骤(5)筛选得到的细菌A、真菌B和放线菌C接种至以丝绸条为唯一氮源、碳源的细菌液体培养基、真菌液体培养基和放线菌液体培养基中恒温静态培养或恒温振荡培养,即得微生物劣化的老化丝绸样和老化样液;

所述细菌液体培养基制备方法为:NaCl 5‑7g、柠檬酸钠5‑7g、Na2HPO4·12H2O 2.5‑4g、水1000mL、pH=7.4‑7.6,121℃灭菌21min;

所述放线菌液体培养基为:NaCl 0.5‑0.7g、KNO3 1g、K2HPO4·3H2O 0.5g‑0.7g,MgCl4·

7H2O 0.5‑0.7g、FeCl4·7H2O 0.01‑0.02g、水1000mL、pH=7.4‑7.6,121℃灭菌21min;

所述真菌液体培养基制备方法为:KH2PO4 1‑1.5g,MgCl4·7H2O 0.5‑0.7g,水1000mL、pH自然,121℃灭菌21min;

步骤(6)中,所述现代丝绸条的尺寸为1×10cm,70‑80%酒精浸泡时间为18‑24h,烘箱温度为40‑45℃,时间为2‑3h;所述培养时间为30‑45d。