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专利号: 2021100635832
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种诱变筛选高产他克莫司筑波链霉菌的方法,所述方法包括:(1)将待测筑波链霉菌接种至GYM平板26~30℃培养5~7天,取颜色为红色或白色的孢子洗脱至生理盐水中,将洗下的孢子悬液过滤、离心后去除上清液,加入生理盐水重悬后,离心、重新洗脱一次,用生理盐水重悬作为孢子悬液;

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(2)步骤(1)孢子悬液稀释至浓度为10 ~10个/mL,取稀释后的孢子悬液置于紫外灯管下20~30cm处照射1~2min后,接种于GYM培养基中,26~30℃避光培养24~32h,收集诱变后菌体,使用ARTP诱变仪处理,之后将整个金属载片投入到装有生理盐水的EP管中,充分振荡,从EP管中取液体涂布于GYM固体培养基上,26~30℃避光培养直至获得突变株;所述ARTP诱变仪处理方式如下:取菌体悬液与等体积10~15%甘油混合于金属载片上并展开均匀,在10~20℃、10~20L/min工作气流量条件下使用ARTP诱变仪处理50~60s,;

(3)步骤(2)所得突变株涂布于GYM固体培养基上,26~30℃培养4~7天至能观测到单菌落,将单菌落用无菌牙签棒戳刺,并且在新的GYM固体培养基,按照顺序重新划单菌落,所得菌株发酵后经液相检测他克莫司产量,获得高产他克莫司筑波链霉菌。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(3)所获得的高产他克莫司筑波链霉菌,重新作为初始菌株重复步骤(1)~(3)进行下一轮筛选。

3.一株筛选获得的生长快速筑波链霉菌菌株——筑波链霉菌ZJBN2001(Streptomyces tsukubensis ZJBN2001),保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏日期2020年12月10日,保藏编号CCTCC NO:M 2020883,保藏地址为中国武汉,武汉大学,邮编430072。

4.权利要求3所述筑波链霉菌ZJBN2001在微生物发酵制备他克莫司中的应用。

5.如权利要求4所述的应用,其特征在于所述应用为:将所述筑波链霉菌ZJBN2001接种至发酵培养基,25~28℃、200~250rpm发酵培养24h以上,获得含他克莫司的发酵液,将发酵液经分离纯化,得到所述他克莫司。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述发酵培养基终浓度组成为:葡萄糖5~

15g/L,淀粉50~70g/L,糊精20~50g/L,酵母粉15~20g/L,(NH4)2SO4 1~2g/L,CaCO35~

10g/L,溶剂为水,pH 7.0。

7.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述筑波链霉菌ZJBN2001先接种至种子培养基,培养获得种子液再接种至发酵培养基进行发酵培养,所述种子培养基组成如下:葡萄糖10~20g/L,蛋白胨10~20g/L,酵母粉5~15g/L,CaCO3 1~2g/L,NaCl 5~10g/L,溶剂为水,pH 7.0。