1.一种蕨菜中原蕨苷的分离纯化制备方法,其特征在于操作步骤如下:(1)制备冻干粉
将新鲜的蕨菜,在温度‑50℃以下冷冻干燥,粉碎,获得冻干粉;
(2)制备正丁醇提取物
将冻干粉进行正丁醇冷凝回流提取,过滤,滤渣进行正丁醇冷凝回流提取,合并滤液,减压回收正丁醇得浸膏,‑50冷冻干燥至恒重,获得正丁醇提取物;
(3)制备原蕨苷粗品
将正丁醇提取物进行正向硅胶柱层析分离,采用按体积比30:1的氯仿‑甲醇、按体积比
15:1的氯仿‑甲醇和按体积比10:1氯仿‑甲醇依次进行梯度洗脱,收集体积比10:1的氯仿‑甲醇洗脱液,减压浓缩,获得原蕨苷粗品;
(4)制备原蕨苷
将原蕨苷粗品进行C18反向柱纯化,用浓度30%的甲醇溶液除杂,用浓度45%的甲醇溶液洗脱,收集浓度45%的甲醇溶液洗脱部分,低温冷冻干燥除去溶剂,甲醇重结晶,获得纯度大于98%的原蕨苷,所述原蕨苷为白色粉未状。
2.根据权利要求1所述的一种蕨菜中原蕨苷的分离纯化制备方法,其特征在于:步骤(1)中,粉碎过40目筛。
3.根据权利要求1所述的一种蕨菜中原蕨苷的分离纯化制备方法,其特征在于:步骤(2)中,按照料液比1g:15mL在冻干粉中加入正丁醇,温度85℃条件下回流提取1.5h。
4.根据权利要求1所述的一种蕨菜中原蕨苷的分离纯化制备方法,其特征在于:步骤(3)中,将正丁醇提取物溶解于甲醇中,加入200‑300目正向硅胶混匀,减压浓缩至完全干燥,得到拌样硅胶,过200目筛;将200‑300目正向硅胶装入层析柱并压实,将分离硅胶表面震荡平整,依次加入拌样硅胶、保护硅胶;采用体积比30:1的氯仿‑甲醇进行洗脱,以除去浸膏中部分极性较原蕨苷小的部分杂质;继以体积比15:1的氯仿‑甲醇进行洗脱,以除去浸膏中与原蕨苷极性更为接近的小极性杂质;最后用体积比10:1的氯仿‑甲醇进行洗脱,收集体积比10:1的氯仿‑甲醇洗脱液,45℃减压浓缩,获得原蕨苷粗品。
5.根据权利要求1所述的一种蕨菜中原蕨苷的分离纯化制备方法,其特征在于:步骤(4)中,将C18反向硅胶填料装入玻璃层析柱,活化后依次用双蒸水洗脱、体积浓度10%的甲醇溶液平衡;将原蕨苷粗品溶解在体积浓度10%的甲醇溶液中,0.22μm滤膜过滤,滤液缓慢滴加到经双蒸水洗脱、浓度10%的甲醇溶液平衡的C18反向柱上,以体积浓度10%的甲醇溶液、体积浓度30%的甲醇溶液依次洗脱,除去部分极性大于原蕨苷的杂质,然后使用体积浓度45%的甲醇溶液洗脱,收集体积浓度45%的甲醇溶液洗脱部分,‑20℃预冻24h,使用冷冻干燥机在‑105℃下将洗脱液冻干,甲醇重结晶3次,获得纯度98%的原蕨苷。