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专利号: 2021100710284
申请人: 皖西学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种蕨菜中原蕨苷含量的检测方法,其特征在于检测操作步骤如下:(1)制备供试品溶液

取供试材料,冷冻干燥或真空干燥至恒重,粉碎,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入正丁醇,超声提取,离心分离,残渣继续重复提取2次,合并上清液;减压浓缩除去正丁醇,得到浸膏,将浸膏加入浓度10%的甲醇溶液中溶解,经C18 SPE柱纯化富集,甲醇‑水系统梯度洗脱,收集体积浓度45%的甲醇溶液洗脱部分,冻干,加入适量甲醇溶液制成供试品溶液;

所述供试材料为新鲜蕨菜或干蕨菜;

所述冷冻干燥温度为‑50℃以下;真空干燥温度为40‑60℃;

提取剂正丁醇与蕨菜冻干粉的料液比为1g:10‑30mL;

超声波提取条件:提取功率200w 300 w、频率为3.0kHz 5.0 kHz、超声提取20‑40min;

~ ~

所述C18 SPE柱纯化富集为将原蕨苷正丁醇提取物溶于浓度10%的甲醇溶液,上样,采用体积浓度10%的甲醇溶液、体积浓度20%的甲醇溶液和体积浓度45%的甲醇溶液依次梯度洗脱;收集体积浓度45%的甲醇溶液洗脱部分,‑105℃冻干,溶于甲醇制成供试品溶液;

(2)高效液相色谱法检测

将供试品溶液采用高效液相色谱法进行检测,测得供试品溶液中原蕨苷的峰面积值;

高效液相色谱法的检测条件:C18反向色谱柱250× 4.6mm,5μm;流动相:流动相A为水,‑1流动相B为甲醇,检测波长214nm;柱温30℃;流速:1.0mL·min ;进样量10μL;梯度洗脱;0‑

5min, 20‑40% B; 5‑10min, 40‑45% B; 10‑20 min, 45‑50% B; 20‑25min, 50‑57% B; 

25‑27min, 57‑100% B; 27‑35min, 100% B;

(3)构建原蕨苷标准曲线方程

‑1

精密称取标准品原蕨苷,置于容量瓶中,加甲醇溶液配成5‑300 μg.mL 的五个以上的对照品溶液,采取步骤(2)的高效液相色谱法检测条件,测定五个以上的对照品溶液的峰面积,获得原蕨苷标准曲线方程;

(4)测定原蕨苷含量

将测得的供试品溶液的峰面积值,代入步骤(3)构建的原蕨苷标准曲线方程,计算出供试品溶液中原蕨苷的浓度,进而计算出供试品中原蕨苷的含量。