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专利号: 2021100898359
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种提高酿酒酵母工程菌脂肪酸乙酯产量的方法,其特征在于,包括如下步骤:在酿酒酵母宿主中,阻断甾醇酯途径、三酰基甘油途径和β氧化途径,并表达了蜡酯合成酶,构建得到产脂肪酸乙酯的酿酒酵母工程菌;

在所述的酿酒酵母工程菌发酵培养过程中,发酵30~40h时一次性补加1~3%菜籽油并且开始按照6~10mL/h的流速流加乙醇;并在发酵罐中葡萄糖浓度低于4~6g/L后,开始补加葡萄糖,将发酵罐葡萄糖浓度维持在5~10g/L,进行发酵培养,得到含有脂肪酸乙酯的发酵液。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,阻断甾醇酯途径是通过敲除甾醇酰基转移酶ARE1和ARE2的编码基因。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,阻断三酰基甘油途径是通过敲除甘油酰基转移酶DGA1和LRO1的编码基因。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,阻断β氧化途径是通过敲除长链脂肪酸转运体PXA2的编码基因。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的蜡酯合成酶WS2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在发酵培养过程中,pH维持在5~6,发酵前

30~40h转速为180~220rpm,空气流量2~3vvm,30~40h后转速为350~450rpm,空气流量4~6vvm。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在发酵培养之前,将所述的酿酒酵母工程菌活化后在种子培养基中培养得到种子液,再将种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述的种子培养基为(g/L):酵母粉5~15,蛋白胨15~25,葡萄糖15~25。

9.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述的发酵培养基为(g/L):葡萄糖50~

70、YNB 6~7、酵母粉15~20、蛋白胨2~4、K2HPO4 7~8、KH2PO4 9~10、醋酸2~4。