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专利号: 2021101207019
申请人: 江苏大学
专利类型:发明专利
专利状态:授权未缴费
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-05-15
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种乌鳢表皮黏液抗菌肽的制备方法,其特征在于,步骤如下:

(1)乌鳢前处理:收集乌鳢表皮的黏液,备用;

(2)热处理:将步骤(1)收集得到的乌鳢表皮的黏液进行水浴加热,得到热处理的黏液;所述水浴的温度为50 ~ 80℃,时间为5~10 min;

(3)离心:将步骤(2)中热处理的黏液冷却至一定温度后,离心收集上清液;所述冷却至一定温度为5 ℃以下;所述离心的条件为:离心转速为6000 ~ 8000 r/min,离心时间为20~ 40 min;

(4)冷冻干燥保存:将步骤(3)中收集得到的上清液进行预冷冻后,再采用真空冷冻干燥机进行干燥制粉,得到乌鳢表皮黏液的冻干粉,即为粗提物;

(5)采用Sephadex G-100凝胶柱对步骤(4)中的冻干粉进行纯化,然后用蒸馏水洗脱,洗脱后收集产物在280 nm下检测吸光值,最后收集组分,经冻干处理,得到冻干的组分;所述纯化时上样的样品为冻干粉与蒸馏水的混合溶液,样品浓度为10~20 mg/mL;所述纯化的柱规格为1.2 cm × 70 cm,流速为0.8 - 1.2 mL/min,上样体积为2-5 mL;

(6)采用阳离子交换柱对步骤(5)中得到冻干的组分进一步纯化,使用磷酸盐缓冲液线性洗脱,洗脱后收集产物在280 nm下检测吸光值,最后收集组分,经透析脱盐、冻干,得到的产物即为乌鳢表皮黏液抗菌肽;所述纯化的柱规格为1.2 cm × 50 cm,流速为0.8 - 1.5mL/min;所述磷酸盐缓冲液线性洗脱时的洗脱液包括洗脱液A和洗脱液B;所述洗脱液A为40- 50 mM磷酸盐缓冲液,pH为 6.0– 6.5;所述洗脱液B是在洗脱液A中加入NaCl,NaCl 的终浓度为0.5 - 1.0 M。

2.根据权利要求1所述的乌鳢表皮黏液抗菌肽的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述收集乌鳢表皮的黏液的具体操作为:将新鲜乌鳢受伤处理后、洗净,置于水中,每隔1-2小时用塑料刮刀轻轻刮擦鱼背收集黏液;未收集乌鳢腹侧皮肤的粘液,以避免肠和精子污染。

3.根据权利要求1所述的乌鳢表皮黏液抗菌肽的制备方法,其特征在于,步骤(4)中所述预冷冻的温度为-40℃,时间为5~7h。

4. 根据权利要求1所述的乌鳢表皮黏液抗菌肽的制备方法,其特征在于,步骤(6)中,所述纯化时上样的样品为冻干的组分与蒸馏水的混合溶液,样品浓度为10~20 mg/mL。