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专利号: 2021101550507
申请人: 山西大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-03-26
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种可检测GSTs含量的近红外荧光探针,其特征在于,结构式为L1或L2:

2.如权利要求1所述的一种可检测GSTs含量的近红外荧光探针的合成方法,其特征在于,步骤如下:

将对羟基苯甲醇溶于二氯甲烷中,于冰水浴中搅拌5min,随后加入三乙胺,搅拌30min后滴加溶于二氯甲烷中的1‑氯‑2,4‑二硝基苯,搅拌反应过夜,TLC检测反应进程,用饱和氯化钠和二氯甲烷萃取洗涤,无水硫酸钠干燥有机相,用石油醚/乙酸乙酯=3:1过柱纯化得淡黄色粉末,即产物(4‑(2,4‑二硝基酚氧基)苯基)甲醇;所述对羟基苯甲醇、三乙胺和1‑氯‑2,4‑二硝基苯的摩尔比为1:3:1;

将(4‑(2,4‑二硝基酚氧基)苯基)甲醇,3,7‑双(二乙氨基)‑10H‑吩恶嗪‑10‑羰基氯,碳酸钠和4‑二甲氨基吡啶溶于二氯甲烷中,在氮气保护,冰浴条件下搅拌反应8h;除去溶剂并将粗产物进行硅胶柱色谱纯化,得到棕色固体4‑(2,4‑二硝基苯氧基)苄基3,7‑双(二乙氨基)‑10H‑苯恶嗪‑10‑羧酸盐即L1;所述(4‑(2,4‑二硝基酚氧基)苯基)甲醇、3,7‑双(二乙氨基)‑10H‑吩恶嗪‑10‑羰基氯、碳酸钠和4‑二甲氨基吡啶的摩尔比为1.2:1:3:1;

或者,

将(4‑(2,4‑二硝基酚氧基)苯基)甲醇,3,7‑双(二甲氨基)‑10H‑吩噻嗪‑10‑羰基氯,碳酸钠,4‑二甲氨基吡啶溶于二氯甲烷中,在氮气保护,冰浴条件下搅拌反应8h。除去溶剂并将粗产物进行硅胶柱色谱纯化,得到棕色固体4‑(2,4‑二硝基苯氧基)苄基3,7‑双(二甲氨基)‑10H‑吩噻嗪‑10‑羧酸盐即L2;所述(4‑(2,4‑二硝基酚氧基)苯基)甲醇、3,7‑双(二甲氨基)‑10H‑吩噻嗪‑10‑羰基氯、碳酸钠和4‑二甲氨基吡啶的摩尔比为1.2:1:3:1。

3.如权利要求1所述近红外荧光探针在检测GSTs中的应用。

4.一种检测GSTs的方法,包括如下步骤:(1)、配制pH=7、10mM、含10%无水乙醇的磷酸缓冲溶液为反应体系,将L1或L2溶于DMSO配制成2mM的制备液,配置20mM的谷胱甘肽(GSH)溶液和1mg/mL的GSTs溶液;

(2)、取900μL的反应体系溶液、1μL L1或L2的DMSO溶液、50μL的GSH溶液,50μL的GSTs溶液加到一个荧光比色皿中,37℃水浴下进行荧光扫描,随着时间的增加,676nm(L1)或686nm(L2)处荧光强度逐渐增强;

(3)、在5个2mL的EP管中,分别加入体系溶液944μL、943μL、942μL、941μL、940μL;1μL L1的DMSO溶液;50μL的GSH溶液,不同量的GSTs溶液,使GSTs在体系中的浓度分别为6μg/mL、7μg/mL、8μg/mL、9μg/mL、10μg/mL、摇匀在37℃水浴中放置3h后,在676nm处扫描所得不同浓度的荧光强度;以GSTs浓度为横坐标,676nm荧光强度为纵坐标绘制图,得GSTs的工作曲线;线2

性回归方程为:y=6.507x+48.218,R=0.99445。x的单位为μg/mL;

(4)、在6个2mL的EP管中,先分别加入体系溶液950μL,1μL L2的DMSO溶液;50μL的GSH溶液,不同量的GSTs溶液,使GSTs在体系中的浓度分别为50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、

300ng/mL、400ng/mL、500ng/mL,摇匀在37℃水浴中放置3h后,在686nm处扫描各浓度的荧光强度;以GSTs浓度为横坐标,686nm荧光强度为纵坐标绘制图,得GSTs的工作曲线;线性回归2

方程为:y=0.08197x+11.1103,R=0.99145。x的单位为ng/mL。

5.如权利要求1所述的探针在制备细胞成像试剂中的应用。