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专利号: 202110202177X
申请人: 东北林业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种敲除GLK基因的gRNA,其特征在于,包括以下所述序列的任意一条:gRNA‑1:5′‑GTCAGCTTTGAGGAACACAAAGG‑3′;

gRNA‑2:5′‑ACTACCCAGACTTCTCCGATGGG‑3′;

gRNA‑3:5′‑GCCGACTTATCCGTTAGCGGCGG‑3′;

gRNA‑4:5′‑CCGACTTATCCGTTAGCGGCGGT‑3′。

2.一种gRNA位点靶向敲除GLK基因的CRISPR/Cas9系统,其特征在于,包括权利要求1中所述的gRNA‑1、gRNA‑2、gRNA‑3以及gRNA‑4中的任意一条DNA序列。

3.根据权利要求1‑2任一项所述的gRNA位点靶向敲除GLK基因的CRISPR/Cas9系统构建GLK基因敲除的植物突变体的方法,其特征在于,包括以下步骤:以GLK基因为编辑靶基因,将体外纯化的Cas9蛋白与GLK‑gRNA混合后的核糖核蛋白复合体,通过微粒轰击植物体愈伤组织,转化后的愈伤组织经过继续培养和植株再生,获得无选择标记基因、无T‑DNA插入的基因编辑的植物突变体。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述植物愈伤组织来源于白桦。

5.根据权利要求1所述的敲除GLK基因的gRNA或权利要求2‑3任一项所述的gRNA位点靶向敲除GLK基因的CRISPR/Cas9系统在构建GLK基因敲除的植物突变体中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述植物突变体为白桦突变体。