1.一种检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针,其结构式如式(1)所示:式(1)。
2.一种检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将溶解了三氯氧磷的CH2Cl2溶液冷却的溶剂中,完成后继续加入环己酮,并将得到的混合液加热回流,完成后对得到的反应液冷却结晶,得到的固体产物记为产物1,备用;
(2)将2,3,3‑三甲基吲哚和碘乙烷溶解在甲苯中,将得到的混合物加热回流,完成后将得到的反应液冷却结晶,将得到的固体产物洗涤干净,记为产物2,备用;
(3)将所述产物1、产物2、乙酸钠溶解在乙酸酐中,将得到的混合物进行加热反应,完成后将得到的反应液冷却结晶,将得到的固体产物洗涤干净后烘干,记为产物3,备用;
(4)Cy7和乙酸钠溶于无水溶剂中,然后在保护气氛中将得到的混合物加热反应,完成后用饱和碘化钾溶液洗涤得到的反应液,再用二氯甲烷萃取反应液,将得到的萃取液进行浓缩,然后对得到的固体产物进行纯化,纯化后产物记为产物4,备用;
(5)将4‑溴甲基‑3‑硝基苯甲酸、二氯甲烷和DMF混合后冷却,然后加入草酰氯,待气体逸出停止,对反应液搅拌,反应完成后浓缩反应液,得4‑溴甲基‑3‑硝基苯甲酰氯,备用;
(6)将所述产物4溶解在无水二氯甲烷中,然后在保护气氛下先加入三乙胺,再加入溶解在无水二氯甲烷中的所述4‑溴甲基‑3‑硝基苯甲酰氯,并使反应在低于室温的冷却环境中进行,待反应液由红色变为绿色后继续在所述冷却环境下静置,然后将反应液恢复至室温并静置,反应完成后除去溶剂,对得到的固体产物进行纯化,纯化后产物记为产物5,备用;
(7)在二氯甲烷和在碳酸氢钠存在下,于保护气氛中用苯丁酸氮芥与所述产物5反应,反应结束后除去反应液中溶剂,对得到的固体产物进行纯化,即得所述荧光分子探针。
3.根据权利要求2所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,加热回流的温度为20 40℃,时间为3 5h;
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或者,所述步骤(1)中,所述混合溶剂包括DMF和CH2Cl2,混合溶剂的温度需要控制在零下15~10℃;优选地,所述CH2Cl2和DMF的体积比=1:1~3:1;
或者,所述步骤(1)中,CH2Cl2溶液中三氯氧磷的浓度为0.3~0.9 μmol/L;
进一步地,所述步骤(2)中,2,3,3‑三甲基吲哚和碘乙烷的摩尔比为5:9 2:3。
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4.根据权利要求2所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中,加热回流的温度为80 100℃,时间为20h;
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或者,所述步骤(2)中,可以采用石油醚、DMF中的任意一种对结晶得到的固体产物进行洗涤。
5.根据权利要求2所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中,产物1、产物2、乙酸钠的添加比例依次序为1:3:0.5,摩尔比;
或者,所述步骤(3)中,所述加热反应温度为50 80℃,时间为3h;优选地,反应过程中对~
反应液进行搅拌;
或者,所述步骤(3)中,采用饱和的碳酸氢钠缓冲液洗涤固体产物,直到没有气泡出现,然后将固体产物用水洗涤后烘干,即可。
6.根据权利要求2所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)中,Cy7和乙酸钠的摩尔比为1:2;
或者,所述步骤(4)中,无水溶剂包括DMF、DMSO中任意一种;
或者,所述步骤(4)中,加热反应温度为80 90℃,时间为5h。
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7.根据权利要求2所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法,其特征在于,所述步骤(5)中,冷却温度为0℃。
8.根据权利要求2所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法,其特征在于,所述步骤(6)中,产物4、三乙胺、溶解在无水二氯甲烷中的4‑溴甲基‑3‑硝基苯甲酰氯的添加比例依次序为1:0.1:2,摩尔比;
或者,所述步骤(6)中,低于室温的冷却环境是指温度为0 5℃的环境。
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9.根据权利要求2所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法,其特征在于,所述步骤(7)中,二氯甲烷:NaHCO3:苯丁酸氮芥=20~30 mL:3~5g:0.2~0.5g;
或者,所述步骤(4)、(6)、(7)中,保护气氛包括惰性气体、氮气中的任意一种;
或者,所述步骤(4)、(6)、(7)中,可以采用二氯甲烷和甲醇洗脱的硅胶色谱法对固体产物进行纯化。
10.权利要求1所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针和/或权利要求2‑9任一项所述的制备方法制备的荧光分子探针在分析化学、生命有机分析化学、生物遗传与变异、疾病预诊及医学临床检测领域中的应用。