1.一种检测DNA羟化酶TET1的纳米传感器,其特征是,包括发夹探针、T4噬菌体β‑葡萄糖基转移酶、内切酶、量子点;
所述发夹探针为能够形成茎环结构的单链DNA,所述发夹探针的一端连接荧光剂,另一端能够与量子点配合连接,形成茎环结构的茎区域含有被内切酶识别并剪切的位点,所述位点含有5‑甲基胞嘧啶;
量子点与荧光剂能够配合发生荧光共振能量转移。
2.如权利要求1所述的检测DNA羟化酶TET1的纳米传感器,其特征是,所述荧光剂为Cy5,所述量子点为605QD;
或,所述内切酶为内切酶MspI。
3.如权利要求1所述的检测DNA羟化酶TET1的纳米传感器,其特征是,发夹探针通过生物素‑链霉亲和素与量子点连接;优选地,发夹探针连接生物素,量子点表面包被链霉亲和素;
或,发夹探针形成茎环结构后,能够连接量子点的一端突出。
4.如权利要求1所述的检测DNA羟化酶TET1的纳米传感器,其特征是,发夹探针的序列为:
m m
TTT TTC ACT CCG GTC ACG TTT TCG TGA CCG GAG TG,其中,C为甲基胞嘧啶。
5.一种权利要求1所述的纳米传感器在检测DNA羟化酶TET1活性中的应用。
6.一种DNA羟化酶TET1活性的检测方法,其特征是,提供权利要求1所述的检测DNA羟化酶TET1的纳米传感器;步骤如下:
1)将所述纳米传感器孵育成茎环结构;
2)将形成茎环结构的纳米传感器与含有DNA羟化酶TET1的待测溶液混合后进行反应;
3)将步骤2)反应后的反应物与尿苷二磷酸葡萄糖、T4噬菌体β‑葡萄糖基转移酶进行反应;
4)将步骤3)反应后的反应物与量子点进行反应,然后进行荧光检测。
7.如权利要求6所述的DNA羟化酶TET1活性的检测方法,其特征是,步骤1)中孵育的温度为90~100℃,孵育时间为3~7min;
或,步骤2)中反应的温度为35~39℃,反应时间为25~35min;
或,步骤2)中的反应液含有HEPES、氯化钠、Fe(NH4)2(SO4)2、抗坏血酸、DTT和α‑KG;优选地,HEPES、氯化钠、Fe(NH4)2(SO4)2、抗坏血酸、DTT和α‑KG的摩尔比为45~55:45~55:0.070~0.080:1.5~2.5:2.0~3.0:0.5~1.5;
或,步骤3)中反应的温度为35~39℃,反应时间为1.5~2.5h;
或,步骤3)中的反应液含有醋酸钾、Tris‑Ac、醋酸镁、DTT;优选地,醋酸钾、Tris‑Ac、醋酸镁、DTT的摩尔比为45~55:15~25:5~15:0.5~1.5;优选地,反应液pH为7.0~8.0;
或,步骤4)中反应的温度为35~39℃,反应时间为1.5~2.5h;
或,步骤4)中的反应液含有醋酸钾、Tris‑Ac、醋酸镁、BSA;优选地,醋酸钾、Tris‑Ac、醋酸镁、BSA的比为5~15:15~25:45~55:50~150,mmol:mmol:mmol:mg;优选地,反应液pH为
7.0~8.0;
或,步骤5)中反应的温度为室温,反应时间为15~25min;
或,步骤5)中反应液含有Tris‑HCl、(NH4)2SO4、MgCl2;优选地,Tris‑HCl、(NH4)2SO4、MgCl2的摩尔比为90~110:5~15:2~4;优选地,反应液pH为7.6~8.4;
或,荧光剂为Cy5,量子点为605QD,荧光检测的激发波长为487~489nm。
8.一种检测DNA羟化酶TET1的试剂盒,其特征是,包括权利要求1所述的纳米传感器、尿苷二磷酸葡萄糖、缓冲溶液。
9.一种权利要求1所述的纳米传感器或权利要求8所述的试剂盒在筛选DNA羟化酶TET1药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用,其特征是,所述DNA羟化酶TET1药物为TET1抑制剂。