1.黄连碱作为荧光探针在Hela肿瘤细胞分群中应用，其特征在于，黄连碱根据荧光强度区分所述Hela肿瘤细胞的异质性，并定位所述Hela肿瘤干细胞；包括步骤：先将Hela肿瘤细胞铺至10 cm大皿中；隔天将黄连碱母液用含10 % FBS的DMEM培养基稀释成20μM/L工作液；每皿细胞加3ml PBS洗一次后加入8ml工作液，37℃，5%的CO2孵育6 h；

取出细胞并吸除培养基，每皿用3 ml PBS清洗后加入3 ml 含EDTA的0.25%胰酶消化2‑

5 min；向皿里加入3 ml 含10% FBS的DMEM培养基终止消化，收集细胞至离心管中500 rpm离心5 min，倒掉上清，细胞用PBS重悬洗涤一次500 rpm离心5min后倒掉上清，并加入1 ml PBS重悬细胞0.45 μm滤膜过滤,后转移至流式管中按黄连碱荧光强弱进行流式分选，并进行平板克隆和软琼脂实验；

平板克隆实验：将流式分选的三群细胞用含10 % FBS的DMEM培养基稀释并分别计数；

每组取1500个细胞加入9 ml的培养基制成细胞悬液；取新的孔板各组每孔3 ml细胞悬液均匀加入到三个孔中使细胞充分分散，并在37℃，5%的CO2培养2周，期间及时补充培养基；

终止培养后将孔板中的培养基吸除，每孔用1 ml的PBS洗两次，加入2 ml的甲醇固定20 min，之后吸除甲醇，用PBS洗两次，每孔加入2 ml的结晶紫染色30 min，回收结晶紫，加入PBS脱色摇床清洗三次，每次5 min；晾干拍照，计算克隆数及克隆形成率；

软琼脂实验：提供1.2%和0.6 %的琼脂溶液和配方为1 ml培养基中加200 μL胎牛血清FBS、20 μL双抗PS、2X DMEM 780 μL的培养基，首先铺下层胶，即取等体积的1.2%琼脂溶液和培养基混合，按每孔3 ml加入到六孔板中待其凝固；将分选的三群细胞利用培养基稀释后计数；

取等体积的0.6%琼脂溶液和培养基混合，按每孔接种50000个细胞加入其中混合均匀；

按每孔3 ml分别加入到铺有所述下层胶上作为上层胶待其凝固，后在所述上层胶上加入

2ml DMEM培养基；37℃，5%的CO2培养2周，期间不断观察各孔克隆形成情况及表面液体挥发情况及时补液，计算结果并统计。