1.一种罗汉果蛋白酶的分离纯化方法,其特征在于包括以下步骤:S1.获取新鲜罗汉果的鲜果汁,经D101大孔树脂柱分离,收集流出的无甜味的分离酶汁,待酶汁完全流出后,用水冲洗D101大孔树脂柱,得冲洗液,合并冲洗液和分离酶汁,得粗酶汁;
S2.采用冷冻干燥法或硫酸铵分级沉淀法纯化,得罗汉果蛋白酶或罗汉果蛋白酶液。
2.根据权利要求1所述的罗汉果蛋白酶的分离纯化方法,其特征在于:新鲜罗汉果的鲜果汁的获取方法选自以下方法中的一种:(1)新鲜罗汉果榨汁,或通过离心脱水机离心,得到一级果汁,再使用水多次浸泡果渣,得浸泡液,合并浸泡液和一级果汁,得鲜果汁;
(2)新鲜罗汉果捣碎或压烂,用水多次浸泡,得浸泡液,浸泡液过滤或离心,弃去果渣,得鲜果汁。
3.根据权利要求1所述的罗汉果蛋白酶的分离纯化方法,其特征在于:所述步骤S2中,所述冷冻干燥法具体为:温度≤‑50℃,真空度≤10Pa。
4.根据权利要求1所述的罗汉果蛋白酶的分离纯化方法,其特征在于:所述步骤S2中,所述硫酸铵分级沉淀法具体为:将粗酶汁加入固体硫酸铵使其饱和度为50 100%,静置,冷冻离心,沉淀用0.03 0.06mol/L、pH为6.5 7.5、含有0.5 1.5mmol/L ~ ~ ~ ~
EDTA的Tris‑HCl缓冲液溶解,再用溶解沉淀后的Tris‑HCl缓冲液透析至用 1 %的 BaCl2 溶液检测不到沉淀,然后冷冻离心,取上清液,得罗汉果蛋白酶液。
5.根据权利要求4所述的罗汉果蛋白酶的分离纯化方法,其特征在于:所述透析具体为:将溶解沉淀后的Tris‑HCl缓冲液装入透析袋于纯水中4℃透析,多次更换透析液,至用1 %的BaCl2溶液检测不到沉淀。
6.根据权利要求4所述的罗汉果蛋白酶的分离纯化方法,其特征在于:所述Tris‑HCl缓冲液为0.05mol/L,pH为7.0,含有1mmol/L EDTA。
7.根据权利要求4所述的罗汉果蛋白酶的分离纯化方法,其特征在于:所述步骤S2中,粗酶汁加入固体硫酸铵,调节饱和度至65%。
8.根据权利要求1所述的罗汉果蛋白酶的分离纯化方法,其特征在于:所述步骤S1中,经D101大孔树脂柱分离出的分离酶汁若有甜味,则倒回原D101大孔树脂柱再次分离,或用新的D101大孔树脂柱再次分离。