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专利号: 2021103279933
申请人: 江西师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种高产苯甲酸甲酯和邻氨基苯甲酸甲酯的菌株,其特征在于:分类名称为Trichomonascus ciferrii,命名为WLW,该菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC),保藏日期为2020年11月26日,保藏号为:GDMCC No 61319,保藏地址是广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼 广东省微生物研究所微生物菌种保藏中心;所述WLW菌株固体培养特征为:固体培养为YPD固体培养基,培养温度为:30±1℃,培养24~36h,菌落直径1~2mm,菌落呈奶油色,半球状,大而隆起,表面较光滑,湿润,不易挑起,有大量向下生长的假菌丝,嵌入固体培养基中使菌落和培养基连接紧密,无向上生长的气生菌丝;所述WLW菌株在革兰氏染色后的显微形态特征为:长大的子细胞仍不与母体脱落分离,并继续出芽,细胞成串排列,形成较长的藕节状假菌丝;

所述WLW菌株的基因登陆号为:MW509947,ITS序列为:CAAAGAACATGCTCAGTACGGCGAGCGAGCGGCAAAGCTCAAATTTGAAATCTGGCGTCGTGTCGGCGTCCGAGTTGTAATTTGAAGATGGCAACTTTGGGAATGGCTCTCGCATATGTTCCTTGGAACAGGACGTCATAGAGGGTGAGAACCCCGTTCATGGCGAGATGACCCAGTCCTATGTAAAGTGCTTTCTAAGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAGTGGGTGGTAAATTCCATCTAAGGCTAAATATTGGCGAGAGACCGATAGCGAACAAGTACAGTGATGGAAAGATGAAAAGAACTTTGAAAAGAGAGTGAAAAAGTACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGGGCTTGAAGTCAGACATGGTATTCAGTGATCAACTGTCTTTCGGGACTGTGCACTCGCTGTTTACTGGGCCAGCATCGGTTTAGGCGGTGAGATAAATGCAAAAGAATGTGGCTCCGCTTTCGGGTGGAGTGTTATAGCTTTTGTTCATATCACCAGCTTGGACCGAGGACCGCGCTTCGGCTAGGATGCTGGCGTAATGACTTTAAGCCACCCGTCTTGAACCACGGACCCAAAA。

2.根据权利要求1所述的高产苯甲酸甲酯和邻氨基苯甲酸甲酯的菌株,其特征在于,筛选步骤如下:

①菌株来源:取发酵池中的曲霉型豆豉,每次取样时,在同一发酵池的上、中、下三层取样后充分混匀,装入同一个无菌塑封袋,保存在4℃冰箱中备用;

②富集培养:取样品5g加入到装有10mL生理盐水的无菌试管中,涡轮振荡5min,吸取

1mL菌液接入装有100mL BHI培养基的250mL锥形瓶中,30℃、170 r/min摇床培养24~48h;

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③菌株筛选:采用平板稀释法,分别取上述培养基中的菌液稀释至10 ~10 ,取100μL分别涂布到YPD培养基中,于30℃培养24~48h,挑取不同菌落形态且能产香的菌株至斜面上,于4℃冰箱中保存;

④分离纯化:将筛选得到菌株在YPD平板上划线分离,在30℃恒温培养箱培养24h,重复划线三次以上,在显微镜下观察到形态单一的菌体则说明菌株已经分离纯化。

3.根据权利要求1所述的高产苯甲酸甲酯和邻氨基苯甲酸甲酯的菌株纯种发酵的豆豉风味物质测定方法,其特征在于:

①挥发性成分萃取

取3g过筛样品,加入到置于水浴中的15mL样品瓶中,采用恒温装置加热,60℃平衡20 min,将SPME装置置于样品瓶上方,60℃恒温萃取30min,采用GC‑MS分析;

②气相色谱‑质谱条件

色谱条件:Agilent 19091S‑433 毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm);进样口温度250℃,载气He,流速1.0mL/min,分流进样;升温程序:起始40℃,保持5min,5℃/min升至85℃,

10℃/min升至250℃,保持5min;

质谱条件:离子源EI,电离电压70eV,离子源温度230℃,四极杆温度150℃;全扫描模式,质量扫描范围35~400amu;

③挥发性成分鉴定与含量计算

采用NIST08 质谱库检索,相似度在80%以上作为有效峰面积进行分析处理,根据保留时间确定纯种发酵豆豉样品挥发性成分,以质谱峰面积考察各组分相对含量。

4.根据权利要求1所述的高产苯甲酸甲酯和邻氨基苯甲酸甲酯的菌株在纯种发酵豆豉的应用,其特征在于:用移液枪取2ml菌株接种到装有100ml YPD液体培养基的锥形瓶中,30℃、170r/min恒温摇床培养36h,再按10%接种量接种到经121℃、20min蒸熟的黑豆中,30℃恒温培养箱培养19d;纯种发酵豆豉样品挥发性成分经SPME萃取,GC‑MS鉴定,共检出41种成分,分别包括呋喃4种,吡嗪5种,醛6种,醇2种,酮2种,酸4种,酯4种,酚4种,其他10种。

5.根据权利要求1或2所述的高产苯甲酸甲酯和邻氨基苯甲酸甲酯的菌株在食品生产开发方面的应用。

6.根据权利要求1或2所述的高产苯甲酸甲酯和邻氨基苯甲酸甲酯的菌株在菌种发酵剂的制备中的应用。