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专利号: 2021103577010
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于适配体和铂修饰金纳米粒子的妥布霉素检测试纸,其特征在于:包括Au@PtNPs‑cDNA‑Apt偶联物、检测线和质控线;所述Au@PtNPs‑cDNA‑Apt偶联物包括铂修饰金纳米粒子、cDNA和特异性识别妥布霉素的适配体Apt,其中,cDNA和适配体Apt部分互补形成cDNA‑Apt杂交双链体;cDNA的5’端或3’端有巯基修饰,铂修饰金纳米粒子和cDNA‑Apt杂交双链体通过Au‑S共价键偶联;

所述检测线包括DNA1,DNA1与cDNA部分互补;所述质控线包括DNA2;DNA2与cDNA完全互补。

2.根据权利要求1所述的妥布霉素检测试纸,其特征在于:所述cDNA的5’端或3’端修饰‑(CH2)6‑SH,其核苷酸序列具体为:

5’‑AAAAAAGACTAGTGCCTAGT‑3’。

3.根据权利要求1所述的妥布霉素检测试纸,其特征在于:所述适配体Apt的序列具体为:

5’‑GACTAGGCACTAGTC‑3’。

4.根据权利要求1所述的妥布霉素检测试纸,其特征在于:所述DNA1的序列具体为:

5’‑AAAAAATCTAGGCACT‑3’。

5.根据权利要求1所述的妥布霉素检测试纸,其特征在于:所述DNA2的序列具体为:

5’‑ACTAGGCACTAGTCTTTTTT‑3’。

6.根据权利要求1所述的妥布霉素检测试纸,其特征在于:所述Au@PtNPs‑cDNA‑Apt偶联物由以下步骤制备得到:

(1)合成粒径为13‑15nm的金纳米粒子;

(2)以步骤(1)的金纳米粒子为种子,得到粒径为38‑41nm的纳米金;

(3)以步骤(2)的纳米金为核,合成核壳结构的铂修饰金纳米粒子Au@Pt NPs;

(4)cDNA和适配体Apt热变性,形成cDNA‑Apt杂交双链体,与硫醇类还原剂进行巯基化反应,然后加入到步骤(3)的铂修饰金纳米粒子Au@Pt NPs中,振荡孵育,再加入dATP振荡孵育,得到所述Au@PtNPs‑cDNA‑Apt偶联物。

7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于:在步骤(4)中,加入dATP振荡孵育后还包括稳定的步骤,具体为:加入NaCl溶液,先20‑25℃静置,再在3‑5℃下保存。

8.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于:在步骤(4)中,所述硫醇类还原剂包括三(2‑羧乙基)膦。

9.一种使用权利要求1‑8任一项所述的妥布霉素检测试纸检测妥布霉素的方法,包括低灵敏模式和高灵敏模式,其特征在于,具体包括以下步骤:(1)将待测溶液加到试纸上,溶液依次经过Au@PtNPs‑cDNA‑Apt偶联物和检测线向质控线移动;

(2)当待测溶液中不存在妥布霉素时,Au@PtNPs‑cDNA‑Apt偶联物中的cDNA与质控线中全互补的DNA2优先互补结合,Au@PtNPs在质控线上聚集;

当待测溶液中存在妥布霉素时,Au@PtNPs‑cDNA‑Apt偶联物中的适配体Apt与妥布霉素特异性结合,游离的cDNA分别与DNA1和DNA2结合,Au@PtNPs在检测线和质控线上聚集;

(3)低灵敏模式:当仅有质控线呈红色,待测溶液中不存在目标物妥布霉素;当检测线和质控线均呈红色,待测溶液中存在目标物妥布霉素;

高灵敏模式:取TMB底物缓冲液滴加至检测线上,若显色,待测溶液中存在目标物妥布霉素;若不显色,待测溶液中不存在目标物妥布霉素。

10.根据权利要求9所述的检测方法,其特征在于:低灵敏模式下对检测线进行光密度测定,或高灵敏模式下对检测线进行灰度测定,计算出待测溶液中妥布霉素的含量。