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专利号: 202110429093X
申请人: 云南萱嘉生物技术有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种高效制备2‑O‑α‑D‑葡萄糖基‑L‑抗坏血酸的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)在BbrsP发酵液中加入蔗糖,再加入Vc水溶液,用NaOH调节体系pH为5.2,然后加入适量去离子水得到混合液,所述BbrsP发酵液是将具有重组质粒pET28a‑bbrsp的阳性克隆子重组大肠杆菌E  .coliIFE‑BbrSP在含有50μg/mL卡那霉素的LB培养基中制备得到的,所述重组质粒pET28a‑bbrsp是根据NCBI数据库上NCBI登录号为NO. CP021391的短双歧杆菌Bifidobacterium brevis来源的蔗糖磷酸化酶基因bbrsp序列制备得到的;

(2)将所述步骤(1)得到的混合液加入到烧瓶中,于45℃水浴条件下磁力搅拌反应72h,然后将反应液用陶瓷膜过滤分离,将反应所产生的大量AA‑2G、Vc、蔗糖、果糖从反应体系中过滤分离,得到清液A和残留菌体溶液C;

(3)将树脂装柱,然后将所述步骤(2)得到的清液A以2BV/m的速度上柱进行吸附,收集流出液,得到溶液B;

(4)将步骤(3)得到的溶液B加入到步骤(2)中菌体溶液C的中,继续于45℃水浴条件下磁力搅拌反应72h,得到所述2‑O‑α‑D‑葡萄糖基‑L‑抗坏血酸;

所述步骤(3)中将树脂装柱为将树脂以2‑6级串联的方式装柱,单柱树脂的用量为

50mL;

所述步骤(3)中所述的树脂为XR651树脂。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)得到的混合液中蔗糖的初始浓度为270 g/L,Vc的初始浓度为210 g/L,每1L混合液中含有0.5L BbrsP发酵液。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中加入的VC水溶液的pH为5.2。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述树脂串联的数量为5。