1. 一种复制缺陷型犬细小病毒包装载体,其特征在于包括载体ITR质粒和辅助质粒,其中,载体ITR质粒包含核心元件ITR‑P‑EGFP‑TS‑ITR,该核心元件的核苷酸序列如SEQ ID NO .1所示,辅助质粒包含核心蛋白基因NS‑VP,该核心蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO .2所示;
所述的载体ITR质粒的起始载体为pBluescript II SK(+);
所述的辅助质粒的起始载体为pBluescript II SK(+)。
2.根据权利要求1所述的复制缺陷型犬细小病毒包装载体,其特征在于:所述的载体ITR质粒为将核心元件ITR‑P‑EGFP‑TS‑ITR插入到起始载体中得到;
所述的辅助质粒为将核心蛋白基因NS‑VP插入到起始载体中得到。
3.权利要求1 2任一项所述的复制缺陷型犬细小病毒包装载体在制备犬用疫苗中的应~用。
4.一种复制缺陷型重组犬细小病毒,其特征在于由权利要求1 2任一项所述的复制缺~陷型犬细小病毒包装载体共同转染动物细胞得到。
5.权利要求4所述的复制缺陷型重组犬细小病毒的制备方法,其特征在于包含如下步骤:(1)采用含10%FBS的DMEM培养动物细胞至汇合度为70~80%;
(2)将Opti‑MEM Medium、Lipofectamine 3000 试剂混合,得到溶液A;将Opti‑MEM Medium、P3000试剂、复制缺陷型犬细小病毒包装载体混合,得到溶液B;按照体积比1:1的比例将溶液B加入到溶液A中,混匀后得到脂质体/DNA混合物并静置15 min;
(3)弃去步骤(1)中培养基,更换为不含抗生素的无血清DMEM培养基,逐滴加入步骤(2)静置后的脂质体/DNA混合物,混匀;转染成功后,裂解细胞,离心,收集细胞上清即为复制缺陷型重组犬细小病毒。