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专利号: 2021104744256
申请人: 长江大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-28
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于PCR检测汞离子的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、将多种不同已知浓度的汞离子溶液分别添加至含有T7pro、T7terpro和Helper的缓冲液进行混合反应得到多种混合物;所述T7pro的序列为:TAATACGACTCACTATAGGGATTCTTTCTT;所述T7terpro的序列为:TGCTAGTTATTGCTCAGCGGATTCTTTCTT;所述Helper的序列为TTGTTTGTTTGGGG;

S2、分别向多种所述混合物中加入外切核酸酶III继续反应;

S3、向加入外切核酸酶III后的多种混合物中分别继续加入模板,dNTP和Taq聚合酶并进行PCR反应;

S4、向进行PCR反应后的多种混合物中分别加入SGI;

S5、检测加入SGI后的多种混合物的荧光信号,根据所述荧光信号与所述汞离子的已知浓度得到两者的线性关系式;

S6、将待测液与所述含有T7pro、T7terpro和Helper的缓冲液混合进行混合反应,之后执行步骤S2‑S4,之后检测所述待测液的荧光信号,结合步骤S5的线性关系式得到所述待测液中汞离子的浓度。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在步骤S1中,进行所述混合反应的温度为

35‑37℃,进行所述混合反应的时间为40‑60min。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在步骤S2中,反应的温度为35‑37℃。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,在步骤S2中,反应的时间为20‑30min。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在步骤S3中,加入所述SGI后进行反应的温度为35‑37℃。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,在步骤S3中,加入所述SG I后进行反应的时间为30‑40min。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在步骤S1中,所述缓冲液为Tris‑HCl缓冲液。

8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在步骤S3中,所述模板为pET28a质粒。

9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在步骤S5中,所述线性关系式为Y=

5473580+703818.26373X,其中Y为荧光信号,X为汞离子浓度。

10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在步骤S5中,检测加入SGI后的多种所述混合物在529nm处的荧光信号。