1.检测Cys、GSH和Hcy的多信号荧光探针,其特征在于,所述的荧光分子探针的化学结构式如下所示:
。
2.如权利要求1所述的多信号荧光探针的合成,其特征在于,所述荧光分子探针的制备方法包括以下步骤:
步骤1. 合成3,3'‑((4‑(丁硫基)‑3‑甲酰基‑2‑氧代‑2H‑吡喃‑7‑基)氮杂二基)二丙酸二甲酯
. 将适量3,3'‑((4‑氯‑3‑甲酰基‑2‑氧代‑2H‑吡喃‑7‑基)氮杂二基)二丙酸二甲酯加入二氯甲烷中,再加入适量的正丁硫醇和三乙胺,室温搅拌反应5‑8小时,. 待反应进行完全后,在旋转蒸发仪上旋干溶剂,柱层析纯化得黄色固体产物;
步骤2. 合成探针二甲基3,3'‑((3‑(2‑(苯并[d]噻唑‑2‑基)‑2‑氰基乙烯基)‑4‑(丁硫基)‑2‑氧代‑2H‑吡喃‑7‑基)氮杂二基)(E)‑二丙酸酯.将适量的3,3'‑((4‑(丁硫基)‑3‑甲酰基‑2‑氧代‑2H‑吡喃‑7‑基)氮杂二基)二丙酸二甲酯、2‑(苯并[d]噻唑‑2‑基)乙腈和对甲苯磺酸加入无水乙醇中,室温搅拌反应10‑12小时,
.待反应进行完全后,过滤,滤饼用无水乙醇重结晶得探针二甲基3,3'‑((3‑(2‑(苯并[d]噻唑‑2‑基)‑2‑氰基乙烯基)‑4‑(丁硫基)‑2‑氧代‑2H‑吡喃‑7‑基)氮杂二基)(E)‑二丙酸酯。
3.如权利要求1所述的多信号荧光探针的应用,其特征在于,所述的荧光分子探针在直接定量血浆中总Cys和Hcy中的应用。
4.如权利要求1所述的多信号荧光探针检测Cys、GSH和Hcy的应用,其特征在于,所述的荧光分子探针能够制备在环境中同时定量检测Cys、GSH和Hcy,在生物样品中同时区分荧光成像Cys、GSH和Hcy的器件的应用。
5.如权利要求3所述的荧光分子探针在直接定量血浆中总Cys和Hcy中的应用,其特征在于,直接定量包含的方法包括如下步骤:A. 血清中氧化型Cys和氧化型Hcy的还原:将血清与等体积的三(2‑羧乙基)膦(TCEP,
10 mM)混匀,37℃温育20分钟;
B. 荧光检测:取适量的步骤A中血清溶液加入二甲基亚砜和PBS缓冲液体积比为4/6的探针溶液中(用于定量血清总Cys);取适量的步骤A中血清溶液加入二甲基亚砜和PBS缓冲液体积比为7/3的探针溶液中(用于定量血清总Hcy);得到测试液后前者在室温下振荡30 min,用360 nm激发测量其最大发射波长的荧光强度;后者在室温下振荡60 min,用488 nm激发测量其最大发射波长的荧光强度;
C. 结果计算:使用作图软件,根据实验制作的标准曲线,结合步骤B中检测到的荧光强度值分别计算出血清中总Cys和Hcy的浓度。