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专利号: 2021105368537
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测桑源克雷伯氏菌的LAMP引物组,其特征在于,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1~4所示;所述SEQ ID NO:1~2为外引物;所述SEQ ID NO:3~4为内引物。

2.权利要求1所述引物组在检测桑源克雷伯氏菌和/或桑树细菌性枯萎病中的应用。

3.权利要求1所述引物组在制备检测桑源克雷伯氏菌和/或桑树细菌性枯萎病的试剂盒中的应用。

4.一种桑源克雷伯氏菌和/或桑树细菌性枯萎病的检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含权利要求1所述的LAMP引物组。

5.根据权利要求4所述的检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包含2×LAMP反应缓冲液、Bst DNA聚合酶、ddH2O、荧光染料STYO 9、显色染料SYBR GreenⅠ。

6.一种检测桑源克雷伯氏菌的方法,其特征在于,以待测样本的DNA为模板,利用权利要求1所述LAMP引物组进行LAMP反应,反应结束后通过实时荧光曲线法、显色法或凝胶电泳判断扩增产物是否存在克雷伯氏菌。

7.根据权利要求6所述检测桑源克雷伯氏菌的方法,其特征在于,所述进行LAMP反应时,权利要求1所述LAMP引物组的外引物和内引物的终浓度比例为1:(4~10)。

8.根据权利要求6所述检测桑源克雷伯氏菌的方法,其特征在于,所述判断方法为:在LAMP结束后,通过实时荧光曲线法检测出荧光曲线判断为阳性,检测不出荧光曲线判断为阴性;或通过显色法在反应液中加入SYBR Green Ⅰ后,观察到反应液为绿色判断为阳性,棕色则判断为阴性;或取扩增产物用凝胶电泳检测,出现多重条带判断为阳性,没有出现则判断为阴性。

9.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,LAMP反应的体系为:2×LAMP反应缓冲液

12.5μL,Bst DNA聚合酶0.5μL,权利要求1所述外引物终浓度各为0.1μM,权利要求1所述内引物终浓度各为0.8μM,DNA模板1μL,荧光染料STYO 9 0.5μL,ddH2O补至25μL。

10.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,LAMP反应的程序为61~65℃恒温反应

60min。