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专利号: 2021107063162
申请人: 广西中医药大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于抗病毒抗肿瘤的人树突状细胞诱导组合物,其特征在于,包括:人树突状细胞诱导组合物和不成熟人树突状细胞诱导组合物;所述成熟人树突状细胞诱导组合物由聚肌胞苷酸和重组人白细胞介素1β组成;所述不成熟人树突状细胞诱导组合物由粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子、重组人白细胞介素4和干扰素β组成。

2.根据权利要求1所述的一种用于抗病毒抗肿瘤的人树突状细胞诱导组合物,其特征在于,所述聚肌胞苷酸使用浓度为20μg/ml,所述重组人白细胞介素1β使用浓度为10ng/ml。

3.根据权利要求1所述的一种用于抗病毒抗肿瘤的快速人树突状细胞诱导组合物,其特征在于,所述粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子使用浓度为50ng/ml,所述重组人白细胞介3

素4使用浓度为10ng/ml,所述干扰素β使用浓度为5×10U/ml。

4.根据权利要求1所述的一种用于抗病毒抗肿瘤的快速人树突状细胞诱导组合物,其特征在于,所述组合物还包括基础培养基,所述基础培养基由90%RPMI‑1640培养基和10%胎牛血清组成。

5.一种基于权利要求4所述人树突状细胞诱导组合物的人树突状细胞诱导方法,其特征在于,包括如下步骤:

S1.获取外周血单个核细胞;

S2.用基础培养基重悬外周血单个核细胞,并计数;

S3.调整外周血单个核细胞悬液中外周血单个核细胞浓度;

S4.在外周血单个核细胞悬液中加入不成熟人树突状细胞诱导组合物诱导培养,获得不成熟DC悬液;

S5.在不成熟DC悬液加入人树突状细胞诱导组合物诱导培养,获得成熟DC。

6.根据权利要求5所述的人树突状细胞诱导方法,其特征在于,所述步骤S1具体操作内容为:

(1)使用采血用品和肝素钠抗凝管获取十八周岁以上人体10ml外周血;

(2)准备生物安全柜和相关无菌操作用品;

(3)取同等体积1×PBS,将血液和PBS在离心管中充分混匀;

TM

(4)分别向两个离心管中加入4ml Lymphoprep 淋巴细胞分离液,将10ml血液和PBS混合液沿管壁缓慢注入一离心管,共两管;淋巴细胞分离液和混合液要有分层,离心:

1500rpm,20min,离心调节升速4,降速4;

+

(5)配置CD14细胞分选缓冲液:含有2mM EDTA和2%自体血浆的PBS;

(6)向两支新的15ml离心管中各加入9ml缓冲液,回收人单个核细胞,和缓冲液混匀,离心:1500rpm,5min;

(7)弃上清,将两管细胞合成一管,用10ml缓冲液重悬细胞,轻轻混匀,离心:1500rpm,

5min;

(8)弃上清,用10ml缓冲液重悬,细胞计数,离心:1000rpm,8min;

(9)弃上清,用100μl缓冲液重悬,转移至分选管,重复操作一次;

TM

(10)加入EasySep CD14阳性分选试剂盒中的‑抗人CD14抗体30μl,室温孵育10min;

TM

(11)加入EasySep CD14阳性分选试剂盒中磁珠30μl,室温孵育3min;

TM

(12)准备EasySep 分选磁铁,分选管中加至2.5ml缓冲液,将分选管放入磁铁,室温孵育3min,将上清吸出;

(13)将步骤(11)再重复两次,最后一次结束后将分选管从磁铁中取出。

7.根据权利要求5所述的快速人树突状细胞诱导方法,其特征在于,所述步骤S3中外周

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血单个核细胞浓度调整至8×10~10/ml。

8.根据权利要求5所述的人树突状细胞诱导方法,其特征在于,所述步骤S4中诱导培养具体为37℃,5%CO2饱和湿度的孵育箱培养48小时。

9.根据权利要求5所述的人树突状细胞诱导方法,其特征在于,所述步骤S5中诱导培养具体为37℃,5%CO2饱和湿度的孵育箱培养24小时。

10.一种如权利要求5所述人树突状细胞诱导方法制备的用于抗病毒抗肿瘤的成熟人树突状细胞。