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专利号: 2021107222065
申请人: 武汉纺织大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包括用于裂解释放细菌基因组DNA的裂解试剂组和用于提取基因组DNA的提取试剂组;

所述裂解试剂组由缓冲液和裂解液组成;所述提取试剂组由磁珠结合液、洗涤液、洗脱液组成;所述磁珠结合液由钠盐柠檬酸钠或乙酸钠、还原剂二硫苏糖醇、核酸酶抑制剂盐酸胍和磁珠混悬液四者组成;

所述磁珠结合液中,钠盐的浓度为0.05~0.15M,二硫苏糖醇的含量为0.5~1.5wt%,盐酸胍的浓度为2~5M。

2.根据权利要求1所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒,其特征在于:所述磁珠混悬液中,磁珠的粒径为0.5~5μm。

3.根据权利要求2所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒,其特征在于:所述磁珠表面修饰有羟基或羧基。

4.根据权利要求2所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒,其特征在于:所述磁珠混悬液由磁珠与异丙醇按照质量比1:(30~50)混合配置而成,所述磁珠结合液的pH值为7.5~8.5。

5.根据权利要求1所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒,其特征在于:所述磁珠结合液中,钠盐的浓度为0.1M,二硫苏糖醇的含量为1wt%,盐酸胍的浓度为5M。

6.根据权利要求1所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒,其特征在于:所述洗涤液为体积分数75~85%的异丙醇水溶液或乙醇水溶液;所述洗脱液为蒸馏水、去离子水、超纯水中的一种。

7.根据权利要求1所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒,其特征在于:所述缓冲液为包含质量分数0.5~1.5%曲拉通、1~10mM乙二胺四乙酸二钠、15~25mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和质量分数0.1~0.5%溶菌酶的混合水溶液,所述缓冲液的pH值为7.0~8.0。

8.根据权利要求1所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒,其特征在于:所述裂解液为包含0.2~0.4M氯化钠、质量分数1~3%十六烷基三甲基溴化铵的混合水溶液,所述裂解液的pH值为7.0~8.0。

9.一种稳定型细菌基因组DNA的提取方法,其特征在于:采用权利要求1至8中任一项权利要求所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒进行提取,包括如下步骤:S1,取1~4mL新鲜过夜培养的细菌培养液至离心管中,10000~12000转/分钟离心1~5分钟,弃上清,加入150~300μL缓冲液,用移液器吹打10~15s,混匀菌液,然后置于37℃水浴锅孵育30~60分钟;

S2,向步骤S1的离心管中加入300~800μL裂解液,用移液器吹打10~15s,混匀菌液,然后置于65℃水浴锅孵育10~30分钟;

S3,向步骤S2的离心管中加入10~20μL磁珠结合液,用移液器吹打10~15s后静置1~3分钟,然后用磁力架进行磁分离,吸弃液体;

S4,向步骤S3的离心管中加入500~1000μL洗涤液,用移液器吹打10~15秒后静置10~

30s,然后用磁力架进行磁分离,吸弃液体,开盖室温静置5~10分钟;

S5,向步骤S5的离心管中加入50~100μL洗脱液,用移液器吹打10~15s后静置1~3分钟,然后用磁力架进行磁分离,吸取上清液体至新离心管中,得到稳定型细菌基因组DNA。

10.根据权利要求9所述的稳定型细菌基因组DNA的提取方法,其特征在于:所述提取方法提取到的稳定型细菌基因组DNA在4℃下存放2天后仍不发生降解。