1.一种基于氧化石墨烯的表面增强拉曼传感器对真菌毒素的比率型检测法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)制备Au‑4MBA@Ag NPs‑ToxinApt:S1:将Au‑4MBA@Ag NPs进行磷酸化,得到磷酸化的Au‑4MBA@Ag NPs;所述Au‑4MBA@Ag NPs的磷酸化方法为:将Au‑4MBA@Ag NPs与二水合双(对磺酰苯基)苯基膦化二钾盐混合孵育即得所述磷酸化Au‑4MBA@Ag NPs,并使得Au‑4MBA@Ag NPs的终浓度保持为0.1 mg/mL;
S2:将巯基化真菌毒素适配体中的二硫键进行活化,得到活化的巯基真菌毒素适配体;
S3:将S1中所得磷酸化的Au‑4MBA@Ag NPs和S2中所得活化的巯基真菌毒素适配体混合孵育,得到所述Au‑4MBA@Ag NPs‑ToxinApt;所述的混合孵育过程中滴加NaCl水溶液,所述NaCl水溶液浓度为0.5‑2mol/L;
(2)制备ITO/Au/GO基底:
将ITO玻璃在氯金酸水溶液中电沉积得到金膜,并在所述金膜的表面滴涂氧化石墨烯的PBS缓冲液的水溶液,得到所述ITO/Au/GO基底;
(3)构建Au‑4MBA@AgNPs‑ToxinApt‑GO/Au/ITO传感器并进行检测:步骤I:将步骤(2)中所得ITO/Au/GO基底浸入步骤(1)中所得Au‑4MBA@Ag NPs‑ToxinApt进行孵育反应,得到所述Au‑4MBA@AgNPs‑ToxinApt‑GO/Au/ITO传感器;
步骤II:将步骤I中所得Au‑4MBA@AgNPs‑ToxinApt‑GO/Au/ITO传感器与真菌毒素溶液混合孵育,检测所述传感器的比率拉曼信号强度,进行定性或定量分析。
2.根据权利要求1所述的比率型检测法,其特征在于,步骤(1)的S1中,所述Au‑4MBA@Ag NPs通过以下方法制备得到:向Au‑4MBA NPs溶液中加入20‑40mM柠檬酸钠溶液并混合均匀,分别加入8‑12mM硝酸银溶液和8‑12mM抗坏血酸溶液,孵育反应得到所述Au‑4MBA@Ag NPs。
3.根据权利要求1所述的比率型检测法,其特征在于,步骤(1)的S2中,所述巯基化真菌毒素适配体中的二硫键的活化方法为:将所述巯基化真菌毒素适配体的Tris‑HCl缓冲液的水溶液,与磷酸三氯乙酯混合进行活化反应,即得所述活化的巯基真菌毒素适配体。
4.根据权利要求3所述的比率型检测法,其特征在于,所述巯基化真菌毒素适配体的Tris‑HCl缓冲液的水溶液与磷酸三氯乙酯的摩尔浓度比为1:50‑200。
5.根据权利要求1所述的比率型检测法,其特征在于,步骤(1)的S3中,所述磷酸化的Au‑4MBA@Ag NPs和所述活化的巯基真菌毒素适配体的用量比为1:1‑10。
6.根据权利要求1所述的比率型检测法,其特征在于,步骤(2)中,所述氧化石墨烯的PBS缓冲液的水溶液浓度为0.02‑0.08mg/mL。
7.根据权利要求1所述的比率型检测法,其特征在于,步骤(3)中,所述定量分析的标准曲线的制备方法如下:将所述Au‑4MBA@AgNPs‑ToxinApt‑GO/Au/ITO传感器浸泡在不同浓度的真菌毒素溶液中,静置孵育0.5‑4h,将传感器清洗并烘干,检测激光激发下的拉曼光谱‑1 ‑1
图,取所得拉曼光谱图中1078 cm 的拉曼信号强度I1078与1330 cm 处的拉曼信号强度I1330的比值为纵坐标,并用真菌毒素溶液的浓度取对数值作为横坐标,得到标准曲线。
8.根据权利要求7所述的比率型检测法,其特征在于,所述真菌毒素溶液的浓度范围为
0.0001‑100ng/mL。
9.根据权利要求8所述的比率型检测法,其特征在于,所述真菌毒素为黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮或棒曲霉素。