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专利号: 2021107338998
申请人: 湖南师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种无色杆菌,其特征在于:所述无色杆菌的分类命名为无色杆菌H6,已于2021年3月24日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址:中国,武汉,武汉大学,保藏编号:CCTCC NO:M2021262。

2.一种如权利要求1所述的无色杆菌的应用,其特征在于:用于发酵制备吩嗪‑1‑羧酸和吩嗪‑1‑甲酰胺。

3.一种如权利要求1所述的无色杆菌制备吩嗪‑1‑羧酸和吩嗪‑1‑甲酰胺的方法,其特征在于:包括如下步骤:

1)制备无色杆菌 H6的发酵培养物,通过离心将发酵液和菌体分离开,取上清液按1:1(v/v)的比例加入丁酮萃取,萃取3‑4次,静置后待其自然分层,丁酮萃取层经蒸馏浓缩后得到发酵粗提物,重复萃取3‑4次,合并粗提物用离心浓缩仪冷冻抽提干燥后即得粗提浸膏;

2)将粗提浸膏用甲醇溶解后,上硅胶柱经硅胶柱层析,用氯仿/甲醇作为洗脱剂,从体积比100:0 0:100进行梯度洗脱,收集其中含有吩嗪‑1‑羧酸和吩嗪‑1‑甲酰胺的馏分,洗脱~馏分再经半制备型HPLC制备分离,分离得到的组分经离心浓缩仪冷冻抽干,得到吩嗪‑1‑羧酸和吩嗪‑1‑甲酰胺。

4.如权利要求3所述的一种无色杆菌制备吩嗪‑1‑羧酸和吩嗪‑1‑甲酰胺的方法,其特征在于:所述步骤1)中无色杆菌 H6的发酵培养物的制备方法为:将过夜活化的无色杆菌 H6接入种子培养基,置于28°C、120 rpm摇床过夜培养得种子液,将种子液以5%(v/v)的接种量接入到发酵培养基中,于28°C、120 rpm摇床培养到第三天时,收集发酵液制得发酵培养物。

5.如权利要求4所述的一种无色杆菌制备吩嗪‑1‑羧酸和吩嗪‑1‑甲酰胺的方法,其特征在于:所述种子培养基和发酵培养基的配方都为每升培养基中含有:NaCl 10 g,葡萄糖 

10 g,细菌学蛋白胨 5 g,酵母膏 5 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,K2HPO4 0.7 g,KH2PO4 0.3 g,CaCl2 0.53 g,pH7.0。

6.如权利要求3所述的一种无色杆菌制备吩嗪‑1‑羧酸和吩嗪‑1‑甲酰胺的方法,其特征在于:所述步骤2)中所述HPLC的条件为:色谱柱为Agilent Ultimate XB‑C18柱,流动相包括A相和B相,流动相A相:10%(v/v)的乙腈+0.08%(v/v)的甲酸,溶剂为水,流动B相:90%(v/v)的乙腈,溶剂为水;梯度洗脱程序:0 23min,流动相比例为A相/B相(v/v):95:5 0:~ ~

100;23 26min,流动相比例为A相/B相(v/v):0:100;26 27min,流动相比例为A相/B相(v/~ ~v):0:100 95:5;27 30min;流动相比例为A相/B相(v/v):95:5,检测波长254 nm,流速1 mL/~ ~min。